α冠状病毒nsp1蛋白抑制宿主基因表达的分子机制研究

发布时间：2021-04-24 19:50

　　α冠状病毒（Alphacoronavirus,α-CoV）成员众多,主要包括人冠状病毒229E（Human Coronavirus 229E,HCoV-229E）、人冠状病毒NL63（Human Coronavirus NL63,HCoV-NL63）、猪传染性胃肠炎病毒（Porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV）、猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）、猫传染性腹膜炎病毒（Feline infectious peritonitis virus,FIPV）、猪呼吸道冠状病毒（Porcine despiratory coronavirus,PRCV）和猪急性腹泻综合征冠状病毒（Swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV）。它们能够引起人和动物的呼吸道、消化道、肝脏以及神经系统疾病,对人类生命财产安全造成严重危害。非结构蛋白1（Nonstructure protein 1,nsp1）是冠状病毒编码的多聚蛋白（Polyprote... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：132 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表（Abbreviation）
第1章 文献综述
    1.1 冠状病毒
        1.1.1 冠状病毒的概况
        1.1.2 冠状病毒的分类
        1.1.3 冠状病毒的基因组
    1.2 α冠状病毒
        1.2.1 人冠状病毒的概述
        1.2.2 猪冠状病毒的概述
        1.2.3 猫冠状病毒的概述
    1.3 冠状病毒nsp1蛋白
        1.3.1 nsp1蛋白的功能机制
        1.3.2 nsp1蛋白的结构
    1.4 研究目的及意义
第2章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞、菌株、毒株和动物
        2.1.2 载体与质粒
        2.1.3 主要试剂耗材
        2.1.4 抗体
        2.1.5 重要仪器设备
        2.1.6 主要试剂配制
        2.1.7 软件及数据库
    2.2 实验方法
        2.2.1 nsp1基因原核表达载体的构建
        2.2.2 nsp1蛋白表达和纯化
        2.2.3 nsp1蛋白晶体结构解析
        2.2.4 nsp1基因真核表达载体的构建
        2.2.5 去内毒素小提质粒
        2.2.6 nsp1蛋白生化实验
        2.2.7 构建重组病毒质粒
        2.2.8 BAC质粒的提取
        2.2.9 重组病毒的拯救及扩增
        2.2.10 病毒生长曲线的测定
        2.2.11 重组病毒对仔猪的致病力
        2.2.12 统计分析
第3章 结果与分析
    3.1 nsp1蛋白纯化及晶体结构解析
        3.1.1 nsp1基因原核表达质粒的构建
        3.1.2 nsp1蛋白的原核表达及纯化
        3.1.3 nsp1蛋白结晶条件初筛和优化
        3.1.4 nsp1 蛋白晶体的冻存和数据收集
        3.1.5 nsp1 蛋白晶体结构的解析
    3.2 nsp1氨基酸序列和晶体结构的同源性
        3.2.1 冠状病毒nsp1氨基酸序列的同源性
        3.2.2 冠状病毒nsp1晶体结构的同源性
    3.3 α冠状病毒nsp1对宿主基因的影响
        3.3.1 α冠状病毒nsp1对海参荧光素酶基因的作用
        3.3.2 α冠状病毒nsp1对整体宿主蛋白合成的影响
    3.4 α冠状病毒nsp1抑制宿主蛋白合成的关键区域
        3.4.1 PEDV nsp1 抑制宿主合成的关键区域
        3.4.2 TGEV nsp1 抑制宿主合成的关键区域
        3.4.3 TGEV nsp1 的关键区域对其结构稳定的影响
        3.4.4 91-95这段区域在其它α冠状病毒nsp1中的作用
    3.5 突变nsp1 重要区域对α冠状病毒TGEV的影响
        3.5.1 重组质粒的构建
        3.5.2 重组病毒的拯救
        3.5.3 重组病毒在易感细胞上的复制
        3.5.4 重组病毒对初生仔猪的致病力
    3.6 研究α冠状病毒nsp1发挥生物功能的机制
        3.6.1 从结构角度阐述α和β冠状病毒nsp1的分子机制
        3.6.2 α冠状病毒nsp1作用于哺乳动物细胞中的转录组学
        3.6.3 α冠状病毒nsp1对干扰素方面的影响
        3.6.4 α冠状病毒nsp1对细胞周期的影响
第4章 讨论
    4.1 α冠状病毒nsp1全长的晶体结构
    4.2 Motif（91-95 aa）是α冠状病毒nsp1 抑制宿主基因表达的重要区域
    4.3 突变nsp1关键区域不影响α冠状病毒的复制,但会显著减弱其致病力
    4.4 α冠状病毒nsp1能够调节干扰素及细胞周期
第5章 结论
参考文献
附录
    附录1 合成的nsp1基因核苷酸序列
    附录2 实验所用引物信息
    附录3 在读期间研究成果
    附录4 个人资料
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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[2]鸡传染性支气管炎的防治[J]. 廖思凤.  养殖与饲料. 2019(04)
[3]猫传染性腹膜炎防治[J]. 张健.  畜禽业. 2018(12)
[4]猪流行性腹泻的综合防治措施[J]. 王广俊.  当代畜禽养殖业. 2018(12)
[5]猪传染性胃肠炎防治[J]. 黄汉志.  今日畜牧兽医. 2018(09)
[6]猫传染性腹膜炎研究进展[J]. 王广龙,王勇,戴健涛,王晓枫,徐家付,姜梦,白文顺,杨亮宇,汪善荣.  黑龙江畜牧兽医. 2018(07)
[7]猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎疫苗研究进展[J]. 方博,刘乙兴,张桂红.  广东饲料. 2018(02)
[8]猪流行性腹泻病毒疫苗的研究进展[J]. 姜威.  中国畜牧业. 2018(03)
[9]PEDV在全球范围内的流行与传播[J]. 翁善钢.  中国畜牧业. 2016(11)
[10]中东呼吸综合征的研究进展[J]. 韩志英,刘盼,辛彦娜,丁亚丽,普珍,陈晓丽,卞志红,张海琴.  西藏医药. 2015(03)



本文编号：3157973