20S蛋白酶体β5亚单位对小鼠神经干细胞增殖和分化能力的影响

发布时间：2021-05-22 03:01

　　目的:探讨20S蛋白酶体β5亚单位（PSMB5）对小鼠神经干细胞（NSCs）增殖和分化能力的影响。方法:体外分离培养新生BALB/c小鼠（P0）的NSCs,应用免疫荧光染色观察PSMB5在NSCs中的表达与分布;利用real time RT-PCR方法检测PSMB5 mRNA的表达;荧光分光光度法测定PSMB5相关的糜蛋白酶活性的变化;应用PSMB5-siRNA抑制P0 NSCs中PSMB5基因的表达;使用含有PSMB5基因的重组慢病毒（（lentiPSMB5））感染成年小鼠（P90） NSCs。利用CCK-8试验检测PSMB5对NSCs增殖能力的影响,利用BrdU和Tuj1染色观察PSMB5基因敲低和过表达对NSCs增殖及分化能力的影响。结果:PSMB5主要分布于NSCs的胞浆,P0的NSCs分化后,PSMB5 mRNA的表达下调。成年和老年小鼠NSCs中糜蛋白酶体活性较新生小鼠显著降低。PSMB5敲减后NSCs增殖能力和向神经元分化能力减弱,PSMB5过表达后NSCs增殖能力和向神经元分化能力增强。结论:PSMB5可能参与小鼠NSCs增殖及分化的调控。 

【文章来源】：神经解剖学杂志. 2020,36(03)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
材料和方法
    1 材料
        1.1 实验动物
        1.2 试剂
    2 方法
        2.1 分离培养NSCs
        2.2 NSCs贴壁培养
        2.3 NSCs分化培养
        2.4 PSMB5-siRNA干扰实验
        2.5 PSMB5基因过表达模型构建
        2.6 免疫荧光染色
        2.7 real time RT-PCR检测
        2.8 糜蛋白酶活性检测
        2.9 CCK-8检测细胞增殖能力
        3.0 统计学处理
结果
    1 PSMB5与Nestin共表达于NSCs内
    2分化后的NSCs蛋白酶体各相关基因mRNA的表达水平
    3 P90、P540 NSCs中PSMB5相关的糜蛋白酶样活性下调
    4 PSMB5基因沉默对P0 NSCs的影响
        4.1 PSMB5下调可使P0 NSCs增殖能力下降
        4.2 PSMB5基因沉默抑制P0 NSCs向神经元方向分化
    5 过表达PSMB5对P90 NSCs的影响
        5.1 PSMB5慢病毒验证转染效率
        5.2 过表达PSMB5促进P90 NSCs的增殖潜能
        5.3 过表达PSMB5促进P90 NSCs的分化潜能
讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]靶向PSMB5基因的shRNA慢病毒载体对神经干细胞增殖和分化潜能的影响[J]. 李睿,黄菲菲,陆利,赵云鹤.  神经解剖学杂志. 2017(05)
[2]PSMB5基因过表达促人骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化[J]. 李程浩,赵晨,贺婵婷,陆利,杨桂姣.  神经解剖学杂志. 2015(04)



本文编号：3200854