基因重组溶菌酶的制备及其酶学性质的研究

发布时间：2021-05-22 07:31

　　近年来,利用基因工程手段建构出新的基因工程菌株,通过微生物大规模发酵生产重组溶菌酶,对其产业化具有重要的意义。本课题采用山东大学构建的一种甲醇诱导型产鸡溶菌酶重组毕赤酵母菌株NCY-2的麦芽汁发酵液为研究对象,进行离心、超滤、离子交换处理,优化了蛋清溶菌酶的分离纯化工艺参数,得到的浓缩液,真空干燥制得溶菌酶粉末,研究了重组溶菌酶干酶粉的酶学性质,结果如下:（1）超滤条件的优化:采用30 kDa的聚醚砜（PES）膜,优化出最佳条件:跨膜压力为0.20 MPa、pH 6.5,重组溶菌酶的收率为96.6%,酶活为2612.1 U·mL^-1,是原酶活的1.78倍。（2）离子交换条件的优化:采用D152树脂吸附、洗脱,优化最佳的工艺条件:树脂用量占料液体积比为15%,吸附时间4 h,洗脱液浓度为1.0 mol·L^-1,重组溶菌酶的酶活回收率为95.7%,酶活为3879.6 U·mL^-1,提高了0.5倍,是原酶活的3.1倍。（3）酶学性质的研究:重组溶菌酶干酶粉对溶壁微球菌有抑制效果,酶活为12573.6 U·mg^-1

【文章来源】：烟台大学山东省

【文章页数】：89 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
    1.1 溶菌酶概述
        1.1.1 溶菌酶的研究历程
        1.1.2 溶菌酶的特性与功能
        1.1.3 溶菌酶的作用机理
        1.1.4 溶菌酶的应用现状
    1.2 溶菌酶的提取方法
        1.2.1 超滤法
        1.2.2 离子交换法
        1.2.3 亲和色谱法
        1.2.4 结晶法
        1.2.5 其他分离方法
    1.3 本研究的目的意义、主要研究内容
        1.3.1 目的意义
        1.3.2 主要研究内容
2 超滤膜在重组溶菌酶中的应用
    2.1 实验材料
        2.1.1 材料与试剂
        2.1.2 仪器与设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 重组溶菌酶发酵液的制备
        2.2.2 超滤
    2.3 分析方法
        2.3.1 菌体浓度的测定
        2.3.2 酶活力的测定
        2.3.3 膜性能的评价参数
        2.3.4 数据处理
    2.4 结果与讨论
        2.4.1 重组溶菌酶发酵液的制备
        2.4.2 超滤
    2.5 小结
3 离子交换树脂在重组溶菌酶中的应用
    3.1 实验材料
        3.1.1 材料与试剂
        3.1.2 仪器与设备
    3.2 实验方法
        3.2.1 单因素实验
        3.2.2 固定床吸附实验
        3.2.3 正交实验
        3.2.4 验证实验
    3.3 分析方法
        3.3.1 酶活回收率的计算
        3.3.2 树脂处理方法
        3.3.3 树脂性能评价参数
        3.3.4 数据处理
    3.4 结果与讨论
        3.4.1 单因素实验
        3.4.2 固定床吸附实验
        3.4.3 正交实验
        3.4.4 验证实验
    3.5 小结
4 重组溶菌酶的酶学特性研究
    4.1 实验材料
        4.1.1 材料与试剂
        4.1.2 仪器与设备
        4.1.3 培养基
    4.2 实验方法
        4.2.1 重组溶菌酶干酶粉的制备
        4.2.2 酶学性质实验
        4.2.3 抑菌实验
    4.3 分析方法
        4.3.1 相对酶活的计算
        4.3.2 有关干酶粉的计算
        4.3.3 数据处理
    4.4 结果与讨论
        4.4.1 重组溶菌酶干酶粉的制备
        4.4.2 酶学性质实验
        4.4.3 抑菌实验
    4.5 小结
5 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
参考文献
致谢
附录 攻读硕士学位期间发表的学术论文



本文编号：3201241