人工RNA结合骨架的可溶性表达及其与寡核苷酸链的相互作用分析

发布时间：2021-06-28 20:20

　　为了分析ERBS与其目标寡核苷酸的相互作用,研究设计合成了对应目标寡核苷酸的ERBS基因,并进行了蛋白的原核表达、纯化以及其与目标寡核苷酸的相互作用分析。结果发现,ERBS在Escherichia coli BL21（DE3）中表达时呈现包涵体状态,而改变宿主细胞为Escherichia coli Rosetta（DE3）,可极大提高其可溶性表达水平;纯化的ERBS与FAM标记的寡核苷酸互作分析发现,其解离常数为（9.76±0.62）nmol/L。试验结果可为深入研究不同ERBS与其目标寡核苷酸的相互作用奠定基础。 

【文章来源】：山西农业科学. 2020,48(02)

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 构建载体所需引物
    1.3 合成寡核苷酸链
    1.4 方法
        1.4.1 pET-24a-ERBS表达载体的构建
        1.4.2 BL21(DE3）中ERBS蛋白的表达
        1.4.3 Rosetta(DE3）中ERBS蛋白的表达
        1.4.4 光谱分析
2 结果与分析
    2.1 ERBS的基因序列（5'-3'）及其对应的氨基酸序列
    2.2 ERBS片段的获得
    2.3 蛋白纯化结果
        2.3.1 BL21(DE3）中ERBS蛋白的表达结果
        2.3.2 Rosetta(DE3）中ERBS蛋白的表达结果
    2.4 ERBS蛋白与寡核苷酸链的相互作用
3 结论与讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]植物microRNA靶基因的预测与验证技术研究进展[J]. 崔俊霞,魏康宁,谢伊源,王丽,李用芳.  河南农业科学. 2018(07)
[2]PUF蛋白的研究进展[J]. 张静,王文珍,蒲首丞,孙梅好.  山西农业科学. 2018(05)
[3]猪瘟病毒E2蛋白在大肠杆菌中的表达及免疫原性分析[J]. 王冬雨,魏蔷,刘运超,刘畅,杨棋,崔颖磊,张改平.  河南农业科学. 2018(03)
[4]狂犬病病毒G蛋白的原核表达及反应原性分析[J]. 王攀,刘运超,魏蔷,柴书军,陈玉梅,张改平.  河南农业科学. 2017(04)
[5]包涵体重组蛋白的纯化及复性[J]. 纪剑飞,张成刚.  沈阳药科大学学报. 1998(04)



本文编号：3254988