hsa-let-7b-5p靶向ΔNp63抑制HaCaT细胞的增殖、迁移和侵袭
发布时间：2021-07-02 17:44
目的研究在人表皮细胞中hsa-let-7b-5p的作用和其对ΔNp63表达变化的影响,探讨hsa-let-7b-5p如何影响人表皮细胞的生物功能。方法人角质形成细胞株（HaCaT）分别转染hsa-let-7b-5p mimic NC、hsa-let-7b-5p mimic、hsa-let-7b-5p inhibitor和hsa-let-7b-5p inhibitor NC,通过CCK8检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移和细胞侵袭,利用miRcode网站和RNAhybrid网站预测p63和hsa-let-7b-5p结合,利用实时荧光定量PCR检测hsa-let-7b-5p及p63表达情况。结果 hsalet-7b-5p的高表达对HaCaT细胞的增殖、迁移和侵袭均有抑制作用,hsa-let-7b-5p表达的抑制则促进了HaCaT细胞的增殖、迁移和侵袭。通过网站预测发现hsa-let-7b-5p可与对皮肤表皮细胞有重要作用的p63结合;实时定量PCR分析发现hsa-let-7b-5p影响p63的表达。结论 hsa-let-7b-5p可能通过靶向p63 mRNA水平而在人表皮细胞...
【文章来源】：中国组织化学与细胞化学杂志. 2020,29(04)CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
hsa-let-7b-5p在Ha Ca T细胞中表达的实时荧光定量PCR检测
本研究首先通过荧光定量PCR技术检测到在正常人角质形成细胞中hsa-let-7b-5p可以稳定表达，然后对正常人角质形成细胞进行转染处理使各细胞分组中hsa-let-7b-5p的表达出现差异，进一步通过CCK8实验检测hsa-let-7b-5p的差异表达对细胞增殖所产生的影响，发现hsa-let-7b-5p对细胞增殖有抑制作用，通过Transwell实验发现hsa-let-7b-5p对细胞迁移和侵袭同样有抑制效果，这与之前文献报道过的p63表达缺失对表皮细胞的作用一致[8]。有研究表明，p63在表皮的增殖分化过程中起着关键的调节作用[8]。于是我们利用生信分析网站对hsa-let-7b-5p和p63的结合可能性进行了预测。通过生信分析网站预测发现ΔNp63的3’-UTR与hsa-let-7b-5p有1个结合位点，进一步经过荧光定量PCR实验验证hsa-let-7b-5p可以抑制p63及其存在于皮肤中的主要亚型ΔNp63的表达，证实了网站预测的结果。mi RNA Let-7家族成员Let-7a表达的抑制影响表皮生长因子受体EGFR的表达[9]，而EGFR信号通路又参与很多肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移过程的调控，所以Let-7有可能成为抑制上皮肿瘤发生发展的靶点之一。在哺乳动物中广泛表达的Let-7b参与皮肤黑色素瘤细胞周期的调控，干扰细胞周期的进展促进的癌症的发生[10]。另外有研究证明Let-7b在多种上皮肿瘤中发挥作用，Let-7b-5p参与非小细胞肺癌的发病[11]，而let-7b-3p又可以做为结肠癌的早期检测指标之一[12]，并且let-7b还可以通过抑制CYP2J2的翻译来减少细胞增殖并促进肿瘤细胞的细胞凋亡。这都说明let-7b与上皮组织的增殖分化有密切关系，但其对皮肤表皮细胞的功能影响却鲜有报道。
分别将hsa-let-7b-5p模拟物及抑制剂转染到Ha Ca T细胞中，培育48h后采用CCK8法检测不同组中细胞增殖水平，结果表明转染hsa-let-7b-5p抑制剂的Ha Ca T细胞，其增殖水平显著增强，而转染hsa-let-7b-5p模拟物的Ha Ca T细胞，其增殖水平显著降低（图2），表明hsa-let-7b-5p对细胞的增殖有抑制作用。3 hsa-let-7b-5p抑制Ha Ca T细胞的迁移和侵袭
【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-let-7b通过调控相关细胞周期蛋白影响皮肤黑色素瘤的增殖和凋亡[J]. 秦琴,宁花兰,陈小燕,陈少英,张艳珍,陈大江. 中国美容医学. 2018(07)
[2]宫颈癌细胞中ΔNp63α的MicroRNA表达谱及其对hsa-let-7b-3p的调控机制[J]. 宋伟国,钱莉莉,吴大保,申震,朱靖,程勇,肖卫华,周颖. 肿瘤防治研究. 2018(03)
[3]Hsa-let-7诱导肺癌细胞凋亡与G0/G1期阻滞及其分子机制[J]. 魏辉,侯俊明,董明,杜宁,任宏. 现代肿瘤医学. 2013(11)
博士论文
[1]miR-31在皮肤损伤修复过程中介导炎症阶段向上皮再生阶段转换的功能与作用机制[D]. 石建云.中国农业大学 2018
硕士论文
[1]CircRNA102411通过let-7b-5p调节CCR7表达促进头颈鳞癌侵袭迁移的研究[D]. 王文龙.中国医科大学 2018
本文编号：3260925
【文章来源】：中国组织化学与细胞化学杂志. 2020,29(04)CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
hsa-let-7b-5p在Ha Ca T细胞中表达的实时荧光定量PCR检测
本研究首先通过荧光定量PCR技术检测到在正常人角质形成细胞中hsa-let-7b-5p可以稳定表达，然后对正常人角质形成细胞进行转染处理使各细胞分组中hsa-let-7b-5p的表达出现差异，进一步通过CCK8实验检测hsa-let-7b-5p的差异表达对细胞增殖所产生的影响，发现hsa-let-7b-5p对细胞增殖有抑制作用，通过Transwell实验发现hsa-let-7b-5p对细胞迁移和侵袭同样有抑制效果，这与之前文献报道过的p63表达缺失对表皮细胞的作用一致[8]。有研究表明，p63在表皮的增殖分化过程中起着关键的调节作用[8]。于是我们利用生信分析网站对hsa-let-7b-5p和p63的结合可能性进行了预测。通过生信分析网站预测发现ΔNp63的3’-UTR与hsa-let-7b-5p有1个结合位点，进一步经过荧光定量PCR实验验证hsa-let-7b-5p可以抑制p63及其存在于皮肤中的主要亚型ΔNp63的表达，证实了网站预测的结果。mi RNA Let-7家族成员Let-7a表达的抑制影响表皮生长因子受体EGFR的表达[9]，而EGFR信号通路又参与很多肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移过程的调控，所以Let-7有可能成为抑制上皮肿瘤发生发展的靶点之一。在哺乳动物中广泛表达的Let-7b参与皮肤黑色素瘤细胞周期的调控，干扰细胞周期的进展促进的癌症的发生[10]。另外有研究证明Let-7b在多种上皮肿瘤中发挥作用，Let-7b-5p参与非小细胞肺癌的发病[11]，而let-7b-3p又可以做为结肠癌的早期检测指标之一[12]，并且let-7b还可以通过抑制CYP2J2的翻译来减少细胞增殖并促进肿瘤细胞的细胞凋亡。这都说明let-7b与上皮组织的增殖分化有密切关系，但其对皮肤表皮细胞的功能影响却鲜有报道。
分别将hsa-let-7b-5p模拟物及抑制剂转染到Ha Ca T细胞中，培育48h后采用CCK8法检测不同组中细胞增殖水平，结果表明转染hsa-let-7b-5p抑制剂的Ha Ca T细胞，其增殖水平显著增强，而转染hsa-let-7b-5p模拟物的Ha Ca T细胞，其增殖水平显著降低（图2），表明hsa-let-7b-5p对细胞的增殖有抑制作用。3 hsa-let-7b-5p抑制Ha Ca T细胞的迁移和侵袭
【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-let-7b通过调控相关细胞周期蛋白影响皮肤黑色素瘤的增殖和凋亡[J]. 秦琴,宁花兰,陈小燕,陈少英,张艳珍,陈大江. 中国美容医学. 2018(07)
[2]宫颈癌细胞中ΔNp63α的MicroRNA表达谱及其对hsa-let-7b-3p的调控机制[J]. 宋伟国,钱莉莉,吴大保,申震,朱靖,程勇,肖卫华,周颖. 肿瘤防治研究. 2018(03)
[3]Hsa-let-7诱导肺癌细胞凋亡与G0/G1期阻滞及其分子机制[J]. 魏辉,侯俊明,董明,杜宁,任宏. 现代肿瘤医学. 2013(11)
博士论文
[1]miR-31在皮肤损伤修复过程中介导炎症阶段向上皮再生阶段转换的功能与作用机制[D]. 石建云.中国农业大学 2018
硕士论文
[1]CircRNA102411通过let-7b-5p调节CCR7表达促进头颈鳞癌侵袭迁移的研究[D]. 王文龙.中国医科大学 2018
本文编号：3260925
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3260925.html
