MYO1D对自噬溶酶体生成机制的研究

发布时间：2021-07-04 14:26

　　目的探讨肌球蛋白1D （myosin 1d,MYO1D）对自噬溶酶体形成的影响及其作用机制。方法免疫荧光观察大鼠肾上皮（normal rat kidney,NRK）细胞内MYO1D蛋白质与自噬体标志性蛋白质微管相关蛋白1轻链3（microtubule associated protein 1 light Chain 3, LC3）的共定位关系;CRISPR-Cas9技术敲除NRK细胞中MYO1D基因,并分为MYO1D基因未敲除组,即NC组（non-specific control, NC）与MYO1D基因敲除组,即KO组（myosin1d knockout, KO）;免疫荧光观察两组细胞中LC3与溶酶体关联膜蛋白1 （lysosomal associated membrane protein 1, LAMP1）的共定位关系;蛋白质免疫印迹检测两组细胞自噬底物蛋白P62（p62/sequestosom-1,p62）的表达水平;对两组细胞进行荧光融合蛋白GFP-RFP-LC3（GFP-RFP-LC3）转染,在激光共聚焦显微镜下示踪自噬溶酶体的形成,并利用溶酶体标记探针（lyso-track... 

【文章来源】：新疆医科大学学报. 2020,43(09)

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

MYO1D与LC3的共定位关系(×600)

与NC组比较,KO组LC3与LAMP1共定位程度显著减少,荧光拟合程度降低,见图3、4。与NC组比较,KO组P62蛋白质的表达水平显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01),见表1。图3 两组细胞LC3与LAMP1的共定位关系(×600)

图3 两组细胞LC3与LAMP1的共定位关系(×600)

【参考文献】：
期刊论文
[1]神经妥乐平对阿尔茨海默病大鼠自噬的影响[J]. 赵仲艳,刘涛,赵二义,黄仕雄,徐志育.  安徽医科大学学报. 2020(03)
[2]转录因子EB与自噬及帕金森病相关性研究进展[J]. 金君,吴忧.  中国神经免疫学和神经病学杂志. 2019(01)
[3]p62蛋白功能及相关信号通路研究[J]. 赵萍萍,要乐,蔚丹丹,郝慧芳.  生命科学. 2018(01)
[4]依达拉奉对蛛网膜下腔出血大鼠海马区神经细胞p-ERK1/2蛋白及自噬的影响[J]. 付程凯,李建民,赵宏涛,刘俊杰,赵雅宁,李雪梅,梁文吉.  新疆医科大学学报. 2018(01)



本文编号：3264959