乙酰化修饰对BmApoLp-Ⅱ蛋白稳定性的影响及其机制研究
发布时间：2021-07-06 08:36
蛋白质的乙酰化修饰是一类高度保守的可逆的蛋白质翻译后修饰,它广泛发生于生物体的各种生理活动中。越来越多的研究表明,蛋白质的乙酰化能够调控或参与多种生命活动,且在蛋白质功能发生与稳定性上发挥重要作用。在对家蚕血淋巴内的各种营养储藏类蛋白进行了高通量乙酰化鉴定后,发现人类Apolipoprotein蛋白的同源蛋白,家蚕血淋巴内的BmApoLp-Ⅱ蛋白（Bombyx mori Apolipophorin-Ⅱ）具有很高的乙酰化程度。本课题针对乙酰化修饰对BmApoLp-Ⅱ蛋白的稳定性影响及其机制进行了较为系统的研究,以期能够进一步阐释乙酰化修饰可能参与的调控家蚕营养储藏和利用的新机制。首先对BmApoLp-Ⅱ在真核细胞内的表达和乙酰化程度进行鉴定。利用Trizol法从家蚕卵巢上皮细胞（BmN）中获取家蚕的总RNA,逆转录成cDNA,PCR扩增BmApoLp-Ⅱ基因ORF编码区,通过酶切将其连接到真核表达载体pIEX-1-si-GFP上,这种经改造的载体能够同时共表达GFP蛋白和目的蛋白,共表达的GFP蛋白可用来确定转染效率和作为参照蛋白。将构建的重组载体pIEX-1-si-GFP-BmApoL...
【文章来源】：浙江理工大学浙江省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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３．２真核表达载体ｐＩＥＸ－ｌ－ｓｉ－ＧＦＰ－ＢｍＡｐｏＬｐ－ＩＩ的验证??活化带有ｐＩＥＸ－１－ｓｉ－ＧＦＰ－ＢｍＡｐｏＬｐ－ＩＩ质粒的ＴＧＩ，以其菌液作为ＰＣＲ的模??板，进行验证，然后将ＰＣＲ产物进行核酸电泳，如图３．４（ａ）所示，在预测位置有??一条与目的带大小一致的条带；从ＴＧ１中提取ｐＩＥＸ－１－ｓｉ－ＧＦＰ－ＢｍＡｐｏＬｐ－ＩＩ质粒，??用Ｉ和刀ｗ?Ｉ对其进行双酶切，将双酶切产物进行核酸电泳，结果显示，??在基因预测大小位置有一条大小相同的酶切条带，如图３．４（ｂ），表??明ｐＩＥＸ－１－ｓｉ－ＧＦＰ－ＢｍＡｐｏＬｐ－ＩＩ构建成功，将其送往生物公司进行测序鉴定，序??列和预期一致（结果略）。??ｂｐ?Ｍ?１?ｂｐ?Ｍ?１??５麵?５Ｇ（）Ｇ??３０００??ＢｍＡＰ〇ＬＰ－ｎ?２０００??１５００?１５００??（ａ）?（ｂ）??图３．４ｐＩＥＸ－ｌ－ｓｉ－ＧＦＰ－ＢｍＡｐｏＬｐ－ＩＩ质粒的ＰＣＲ鉴定（ａ）和双酶切鉴定（ｂ）??Ｆｉｇ．３．４?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐＩＥＸ－１－ｓｉ－ＧＦＰ－ＢｍＡｐｏＬｐ－ＩＩ?ｂｙ?ＰＣＲ?（ａ）?ａｎｄ?ｄｏｕｂｌｅ?ｅｎｚ＞?ｍｅｓ??ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ?（ｂ）??１９??
ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测发现，在ＢｍＡｐｏＬｐ－ＩＩ预测大小位置存在目的条带，表明我们成功??通过ＩＰ方法分离得到ＢｍＡｐｏＬｐ－ＩＩ；同样以乙酰化抗体Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测，在??相同位置存在特异性条带，如图３．７所示，表明表达的ＨＩＳ融合ＢｍＡｐｏＬｐ－ＩＩ蛋??白具有较高的乙酰化修饰，和前期质谱乙酰化鉴定结果一致｜５７］。??２１??
【参考文献】：
期刊论文
[1]p53调节蛋白的研究进展[J]. 张红,徐风兰,李鸿岩,胡晓娅,罗冰芝,张哲,刘小琴,孔亚茸. 重庆医学. 2018(21)
[2]蛋白质乙酰化修饰研究进展[J]. 吕斌娜,梁文星. 生物技术通报. 2015(04)
[3]胃肠道饱感信号——Apolipoprotein A-IV的研究进展[J]. 胡秀华,张克英. 饲料工业. 2006(15)
硕士论文
[1]乙酰化修饰调控家蚕BmApoLp-Ⅲ蛋白稳定性的研究[D]. 朱兵.浙江理工大学 2018
[2]乙酰化介导的家蚕Bm30K-3蛋白稳定性机制及抗凋亡功能分析[D]. 吴程程.浙江理工大学 2016
本文编号：3267908
【文章来源】：浙江理工大学浙江省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３．２?基因ＰＣＲ双酶切??￣
３．２真核表达载体ｐＩＥＸ－ｌ－ｓｉ－ＧＦＰ－ＢｍＡｐｏＬｐ－ＩＩ的验证??活化带有ｐＩＥＸ－１－ｓｉ－ＧＦＰ－ＢｍＡｐｏＬｐ－ＩＩ质粒的ＴＧＩ，以其菌液作为ＰＣＲ的模??板，进行验证，然后将ＰＣＲ产物进行核酸电泳，如图３．４（ａ）所示，在预测位置有??一条与目的带大小一致的条带；从ＴＧ１中提取ｐＩＥＸ－１－ｓｉ－ＧＦＰ－ＢｍＡｐｏＬｐ－ＩＩ质粒，??用Ｉ和刀ｗ?Ｉ对其进行双酶切，将双酶切产物进行核酸电泳，结果显示，??在基因预测大小位置有一条大小相同的酶切条带，如图３．４（ｂ），表??明ｐＩＥＸ－１－ｓｉ－ＧＦＰ－ＢｍＡｐｏＬｐ－ＩＩ构建成功，将其送往生物公司进行测序鉴定，序??列和预期一致（结果略）。??ｂｐ?Ｍ?１?ｂｐ?Ｍ?１??５麵?５Ｇ（）Ｇ??３０００??ＢｍＡＰ〇ＬＰ－ｎ?２０００??１５００?１５００??（ａ）?（ｂ）??图３．４ｐＩＥＸ－ｌ－ｓｉ－ＧＦＰ－ＢｍＡｐｏＬｐ－ＩＩ质粒的ＰＣＲ鉴定（ａ）和双酶切鉴定（ｂ）??Ｆｉｇ．３．４?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐＩＥＸ－１－ｓｉ－ＧＦＰ－ＢｍＡｐｏＬｐ－ＩＩ?ｂｙ?ＰＣＲ?（ａ）?ａｎｄ?ｄｏｕｂｌｅ?ｅｎｚ＞?ｍｅｓ??ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ?（ｂ）??１９??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]p53调节蛋白的研究进展[J]. 张红,徐风兰,李鸿岩,胡晓娅,罗冰芝,张哲,刘小琴,孔亚茸. 重庆医学. 2018(21)
[2]蛋白质乙酰化修饰研究进展[J]. 吕斌娜,梁文星. 生物技术通报. 2015(04)
[3]胃肠道饱感信号——Apolipoprotein A-IV的研究进展[J]. 胡秀华,张克英. 饲料工业. 2006(15)
硕士论文
[1]乙酰化修饰调控家蚕BmApoLp-Ⅲ蛋白稳定性的研究[D]. 朱兵.浙江理工大学 2018
[2]乙酰化介导的家蚕Bm30K-3蛋白稳定性机制及抗凋亡功能分析[D]. 吴程程.浙江理工大学 2016
本文编号：3267908
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3267908.html
