利用CRISPR/Cas9核酸酶靶向细菌必需基因的特异性抗菌剂研究（英文）

发布时间：2021-07-09 01:26

　　CRISPR/Cas9核酸酶是一种高效和精确的基因组DNA编辑工具。目前,CRISPR/Cas9被开发成一种新型抗菌剂,通过靶向破坏目标基因,例如抗生素耐药基因来诱导细菌死亡。本研究利用CRISPR携带多靶点优势,同时靶向大肠杆菌必需基因gyrA、gyrB和folA,以达到杀菌作用。本设计针对3个内源基因的CRISPR系列载体,分别含有1个、2个或3个靶点。当IPTG诱导Cas9表达后,CRISPR RNA （crRNA）和反式作用CRISPR RNA （trans-activating CRISPR RNA, tracrRNA）复合物募集Cas9切割靶基因,导致细菌死亡。随着crRNA中靶点数量的增加,杀菌效率显著提高。当含有3个靶点的crRNA作用于细菌基因组时,杀菌效率达到99.35%。此外,在存活的大肠杆菌中,crRNA表达质粒的靶序列和直接重复序列发现碱基缺失,而内源靶基因和Cas9基因均未发生突变。最后,该CRISPR系统还应用于其他大肠杆菌实验室菌株和产肠毒素K88菌株,并表现出高效的杀菌作用。我们设计了一种基于CRISPR/Cas9核酸酶的新型抗菌剂,为抗菌剂的研发提供... 

【文章来源】：中国生物化学与分子生物学报. 2020,36(09)北大核心CSCD

【文章页数】：10 页

【文章目录】：
1 Materials and Methods
    1.1 Bacterial strains
    1.2 Construction of serial crRNA plasmids
    1.3 Construction of the Cas expression plasmid
    1.4 Measurement of bacterial growth inhibition
    1.4 Viability tests
    1.5 Target DNA amplification and sequencing
    1.6 Recovery plasmids from survival cells
    1.7 Statistical analysis
2 Results
    2.1 CRISPR/Cas9-induced bacteria deaths via targeting a single gene
    2.2 CRISPR/Cas9-induced bacteria death via targeting two or three genes
    2.3 Detection of target genes in survival colonies
    2.4 Detection of plasmids in survival colonies
    2.5 CRISPR-induced bacteria death efficiently in different E. coli strains
3 Discussion



本文编号：3272727