广西野鸟源H9亚型禽流感病毒分离鉴定和全基因组测序分析及二重RT-LAMP检测方法的建立
发布时间：2021-08-11 05:25
禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）属于正粘病毒科,A型流感病毒属。H9亚型AIV感染通常会使家禽表现出产蛋量下降、生长缓慢及呼吸道症状,严重危害家禽产业的健康发展。该亚型病毒不仅能感染家禽和鸟类,也能直接感染人类,还能为新的感染人的重组病毒如H5N6、H7N9、和H10N8等提供部分或全部内部基因,严重危害人类公共卫生安全。广西地理位置特殊,加强该地区H9亚型AIV生态进化的研究对禽流感的有效防控具有重要意义为了解广西地区野鸟源H9亚型AIV遗传进化情况,本研究对2017-2019年间从不同活禽市场采集的斑鸠、鸽子和山鸡等野鸟咽喉和泄殖腔拭子进行病毒分离和纯化,用RT-PCR方法扩增分离株全基因并克隆测序,同时对测序结果进行遗传进化分析。结果表明成功分离鉴定出15株H9亚型AIV,均符合低致病性禽流感的分子特征,遗传进化分析发现其全基因来源较为复杂,一共出现3种不同的基因组合形式。为了建立快速检测不同亚型禽流感病毒方法,本研究利用环介导等温扩增技术（Loop-mediated isothermal amplification,LAMP）检测方法快速、敏感和...
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
禽流感病毒结构图
广西大学兽医硕士学位论文广西野鸟源H9亚型禽流感病毒分离鉴定和全基因组测序分析及二重RT-LAMP检测方法的建立162.3.3.2小鼠致病性试验2.3.3.2.1小鼠感染病毒后体重变化情况攻毒后14d内小鼠未出现任何临床症状，体重无明显变化（表2-3）表2-3小鼠感染病毒后体重变化情况Table2-3Weightchangeofmiceafterinoculatedwithvirus2.3.3.2.2小鼠组织病毒滴度小鼠感染72h后有8株分离株可以在小鼠的鼻甲骨和肺中有效复制，有4株分离株仅在小鼠的鼻甲骨中有效复制，有3株分离株无法在小鼠体内复制，小鼠组织病毒滴度结果见图2-1。图2-1接种72h后小鼠组织病毒滴定结果Fig2-1Virustiterinmousetissueson72hourspostinoculation序号Numbers毒株Virus小鼠平均体重Averageweightofmice(g)1d2d3d4d5d6d7d8d9d10d11d12d13d14d1PH/GX/208B1/1725.425.625.725.425.625.926.226.426.526.326.626.426.626.82DV/GX/279B/1924.825.626.224.424.324.724.924.824.724.925.125.325.225.43QL/GX/241B9/1826.626.326.126.426.726.926.826.927.127.227.027.327.227.44PH/GX/222B7/1825.725.825.725.925.826.026.226.126.326.226.426.326.526.55TD/GX/220B14/1826.226.326.426.326.326.426.626.726.626.826.726.827.027.16DV/GX/211B17/1726.025.925.725.826.126.126.226.326.526.426.426.526.626.67QL/GX/241B5/1825.125.125.325.425.625.425.424.525.625.525.625.725.625.78PH/GX/249B2/1825.525.625.625.825.725.725.925.825.825.926.126.126.326.39PA/GX/264B5/1926.526.626.826.526.727.027.427.527.727.527.827.628.028.110TD/GX/191B5/1728.628.928.628.829.229.429.029.329.629.830.030.330.730.411DV/GX/191B6/1727.728.128.528.
广西大学兽医硕士学位论文广西野鸟源H9亚型禽流感病毒分离鉴定和全基因组测序分析及二重RT-LAMP检测方法的建立22图3-1HA基因遗传进化树(1)Fig3-1PhylogenictreeofHAgene分析15株野鸟源分离株HA基因氨基酸序列结果表明分离株QL/GX/241B9/18、PH/GX/208B/17和DV/GX/279B19/19的受体结合位点左侧壁第234位和236位为Q和G，具有这种HA氨基酸序列特点的AIV可以识别并结合禽类细胞表面唾液酸受体SAa2,3Gal，其余12株分离株氨基酸序列在第234位和236位分别为L和G，具有这种HA氨基酸序列特点的AIV可以识别并结合禽类和人类两种细胞表面唾液酸受体SAa2,3Gal和SAa2,6Gal，15株分离株HA基因裂解位点均无多个碱性氨基酸插入，符合LPAIV特征[80],受体结合位点右侧壁第149位氨基酸变化较大，其余受体结合位点均比较保守。(1)◆标记的毒株为本研究分离株，▼标记的毒株为代表毒株，◇标记的毒株为本实验室其它H9亚型AIV分离株
【参考文献】：
期刊论文
[1]2017年国内大型鸡场分离的H9N2禽流感病毒的遗传进化和分子特征分析[J]. 孙王杨吉,朱睿,张建军,石火英. 中国兽医学报. 2019(08)
[2]广东省深圳市首例孕妇感染H9N2禽流感病例流行病学调查[J]. 刘峰,李刚,刘凤仁,俞国龙. 疾病监测. 2019(07)
[3]环介导等温扩增技术在病原微生物快速检测中的研究进展[J]. 杨靖,胡姣姣,柏先泽,王远亮,谢康庄. 食品安全质量检测学报. 2018(23)
[4]H10亚型禽流感病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立[J]. 罗思思,谢芝勋,刘加波,庞耀珊,邓显文,谢志勤,谢丽基,范晴. 中国兽医学报. 2016(01)
[5]H3N2亚型禽流感病毒双重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J]. 刘婷婷,谢芝勋,宋德贵,谢志勤,邓显文,谢丽基,黄莉,罗思思,黄娇玲,曾婷婷. 动物医学进展. 2015(09)
[6]H7亚型和N9亚型禽流感病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立[J]. 罗思思,谢芝勋,谢丽基,邓显文,谢志勤,黄娇玲,曾婷婷. 畜牧兽医学报. 2015(07)
[7]我国H9N2亚型禽流感病毒的流行和进化特点[J]. 顾敏,彭大新,刘秀梵. 生命科学. 2015(05)
[8]甲型流感病毒vRNP及PB1、PB2、PA和NP蛋白的核内转运机制研究进展[J]. 谭伟,谢芝勋. 生物技术通讯. 2015(02)
[9]甲型流感病毒M1、M2和M42蛋白研究进展[J]. 谭伟,谢芝勋. 动物医学进展. 2015(02)
[10]禽流感病毒H9和N2亚型双重RT-PCR检测方法的建立[J]. 徐倩,谢芝勋,谢丽基,邓显文,谢志勤,罗思思,黄莉,黄娇玲,曾婷婷. 动物医学进展. 2015(01)
博士论文
[1]禽流感病毒进化与传播规律研究[D]. 胡明达.军事科学院 2018
硕士论文
[1]广西H9亚型禽流感病毒全基因组序列分析及疫苗候选株的筛选[D]. 徐倩.广西大学 2015
本文编号：3335546
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
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【学位级别】：硕士
【部分图文】：
禽流感病毒结构图
广西大学兽医硕士学位论文广西野鸟源H9亚型禽流感病毒分离鉴定和全基因组测序分析及二重RT-LAMP检测方法的建立162.3.3.2小鼠致病性试验2.3.3.2.1小鼠感染病毒后体重变化情况攻毒后14d内小鼠未出现任何临床症状，体重无明显变化（表2-3）表2-3小鼠感染病毒后体重变化情况Table2-3Weightchangeofmiceafterinoculatedwithvirus2.3.3.2.2小鼠组织病毒滴度小鼠感染72h后有8株分离株可以在小鼠的鼻甲骨和肺中有效复制，有4株分离株仅在小鼠的鼻甲骨中有效复制，有3株分离株无法在小鼠体内复制，小鼠组织病毒滴度结果见图2-1。图2-1接种72h后小鼠组织病毒滴定结果Fig2-1Virustiterinmousetissueson72hourspostinoculation序号Numbers毒株Virus小鼠平均体重Averageweightofmice(g)1d2d3d4d5d6d7d8d9d10d11d12d13d14d1PH/GX/208B1/1725.425.625.725.425.625.926.226.426.526.326.626.426.626.82DV/GX/279B/1924.825.626.224.424.324.724.924.824.724.925.125.325.225.43QL/GX/241B9/1826.626.326.126.426.726.926.826.927.127.227.027.327.227.44PH/GX/222B7/1825.725.825.725.925.826.026.226.126.326.226.426.326.526.55TD/GX/220B14/1826.226.326.426.326.326.426.626.726.626.826.726.827.027.16DV/GX/211B17/1726.025.925.725.826.126.126.226.326.526.426.426.526.626.67QL/GX/241B5/1825.125.125.325.425.625.425.424.525.625.525.625.725.625.78PH/GX/249B2/1825.525.625.625.825.725.725.925.825.825.926.126.126.326.39PA/GX/264B5/1926.526.626.826.526.727.027.427.527.727.527.827.628.028.110TD/GX/191B5/1728.628.928.628.829.229.429.029.329.629.830.030.330.730.411DV/GX/191B6/1727.728.128.528.
广西大学兽医硕士学位论文广西野鸟源H9亚型禽流感病毒分离鉴定和全基因组测序分析及二重RT-LAMP检测方法的建立22图3-1HA基因遗传进化树(1)Fig3-1PhylogenictreeofHAgene分析15株野鸟源分离株HA基因氨基酸序列结果表明分离株QL/GX/241B9/18、PH/GX/208B/17和DV/GX/279B19/19的受体结合位点左侧壁第234位和236位为Q和G，具有这种HA氨基酸序列特点的AIV可以识别并结合禽类细胞表面唾液酸受体SAa2,3Gal，其余12株分离株氨基酸序列在第234位和236位分别为L和G，具有这种HA氨基酸序列特点的AIV可以识别并结合禽类和人类两种细胞表面唾液酸受体SAa2,3Gal和SAa2,6Gal，15株分离株HA基因裂解位点均无多个碱性氨基酸插入，符合LPAIV特征[80],受体结合位点右侧壁第149位氨基酸变化较大，其余受体结合位点均比较保守。(1)◆标记的毒株为本研究分离株，▼标记的毒株为代表毒株，◇标记的毒株为本实验室其它H9亚型AIV分离株
【参考文献】：
期刊论文
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[8]甲型流感病毒vRNP及PB1、PB2、PA和NP蛋白的核内转运机制研究进展[J]. 谭伟,谢芝勋. 生物技术通讯. 2015(02)
[9]甲型流感病毒M1、M2和M42蛋白研究进展[J]. 谭伟,谢芝勋. 动物医学进展. 2015(02)
[10]禽流感病毒H9和N2亚型双重RT-PCR检测方法的建立[J]. 徐倩,谢芝勋,谢丽基,邓显文,谢志勤,罗思思,黄莉,黄娇玲,曾婷婷. 动物医学进展. 2015(01)
博士论文
[1]禽流感病毒进化与传播规律研究[D]. 胡明达.军事科学院 2018
硕士论文
[1]广西H9亚型禽流感病毒全基因组序列分析及疫苗候选株的筛选[D]. 徐倩.广西大学 2015
本文编号：3335546
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