PRMT5沉默与TSA处理对Klf4表达的影响

发布时间：2021-09-02 06:58

　　[目的]旨在研究PRMT5沉默与TSA处理抑制组蛋白去乙酰化酶（HDAC）的活性对人肝癌Hep G2细胞中Klf4基因表达的影响。[方法]采取siRNA转染HepG2细胞的方法沉默PRMT5,TSA处理抑制HDAC,通过RT-PCR、luciferase assay、Western Blotting检测PRMT5沉默和TSA处理对Klf4表达的影响。[结果]在HepG2细胞中转染的三组PRMT5 siRNA均能有效干扰PRMT5的表达,其中si PRMT5-1对于PRMT5 mRNA和蛋白的干扰效果最好。TSA处理细胞后,组蛋白乙酰化修饰H3K9ac增加,HDAC3 mRNA和PRMT5 mRNA表达下降,PRMT5和HDAC1蛋白表达下降。RT-PCR、luciferase assay、Western Blotting结果显示单独沉默PRMT5或用TSA处理细胞,Klf4的转录被激活,而沉默PRMT5的同时用TSA处理细胞对Klf4转录的促进作用更为明显。[结论]PRMT5沉默或TSA处理都能促进Klf4的转录,同时沉默PRMT5和用TSA处理对Klf4的转录激活更强烈,说明PRMT... 

【文章来源】：生物技术. 2020,30(06)

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【部分图文】：

RT-PCR检测siRNA沉默对PRMT5 mRNA表达的影响

在HepG2细胞中分别转染si Ctrl、si PRMT5-1、si PRMT5-2和si PRMT5-3，未转染的作为空白对照。转染72h后，收集细胞，提取总蛋白，Western Blotting检测"-Actin和PRMT5蛋白的水平，其中"-Actin作为内参。如图2显示，转染si PRMT5-1、si PRMT5-2和si PRMT5-3组中，PRMT5蛋白水平都下降，其中转染si PRMT5-1的细胞中PRMT5蛋白水平下降最明显。因而，后续开展的实验采用转染si PRMT5-1的方法实现对细胞内PRMT5的基因沉默。2.3 RT-PCR检测TSA处理对基因表达的影响

用400 nmol/L的TSA处理HepG2细胞从而来抑制细胞内组蛋白去乙酰化酶的活性，DMSO处理的细胞作为对照组，处理24h后收集细胞，提取总RNA，反转录制备cDNA。利用RT-PCR检测PRMT5和HDAC3的mRNA表达。如图3所示，与对照组相比，TSA处理后PRMT5和HDAC3 mRNA的水平下降。2.4 Western Blotting检测TSA处理对组蛋白乙酰化修饰以及蛋白表达的影响

【参考文献】：
期刊论文
[1]非洲爪蛙prmt5.L基因的克隆及时空表达谱分析[J]. 曹青,刘浩,沈滟,刘晨.  生物技术. 2020(01)
[2]Krüppel-like factors 4 and 5:the yin and yang regulators of cellular proliferation[J]. Amr M.GHALEB,Mandayam O.NANDAN,Sengthong CHANCHEVALAP,W.Brian DALTON,Irfan M.HISAMUDDIN,Vincent W.YANG.  Cell Research. 2005(02)



本文编号：3378548