基于AHLs介导的群体感应系统对荧光假单胞菌与腐败希瓦氏菌协同致腐机制探究

发布时间：2021-09-08 13:23

　　大菱鲆是我国重要的水产养殖鱼类,具有很高的经济价值和良好的市场前景,但由微生物引起的大菱鲆腐败变质也是十分严重。研究表明,荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）和腐败希瓦氏菌（Shewanella putrefaciens）是养殖鱼类低温贮藏过程中的特定腐败菌。而腐败菌的生长及特性的表达受其群体感应系统（Quorum Sensing,QS）的调控,其中,N-酰基-高丝氨酸内酯（N-acyl-homoserine lactones,AHLs）是革兰氏阴性菌QS系统中最常见的一类信号分子。课题组已分离出大菱鲆源荧光假单胞菌P.fluorescens PF08和腐败希瓦氏菌S.putrefaciens SP01,其中荧光假单胞菌能产生AHLs,而腐败希瓦氏菌不产AHLs。鉴于此,本研究比较分析了不同类型外源AHLs对菌株SP01 QS信号分子表达情况的影响,进一步探讨菌株PF08对菌株SP01 AHL-QS系统及致腐性的影响,并通过接种于大菱鲆鱼块分析菌株PF08和菌株SP01的致腐能力。主要结论如下:1.生物报告菌法及气相色谱-质谱技术（Gas Chromatogr... 

【文章来源】：渤海大学辽宁省

【文章页数】：85 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
第一章 绪论
    1.1 细菌群体感应
        1.1.1 细菌群体感应概况
        1.1.2 群体感应的类型
    1.2 大菱鲆简介
        1.2.1 大菱鲆资源及消费现状
        1.2.2 大菱鲆研究现状
    1.3 大菱鲆腐败与群体感应
        1.3.1 大菱鲆腐败过程中菌相变化
        1.3.2 大菱鲆腐败与群体感应
    1.4 细菌间的相互作用
        1.4.1 概况
        1.4.2 群体感应在细菌相互作用中的研究进展
    1.5 研究目的意义、内容
        1.5.1 研究目的意义
        1.5.2 研究内容
第二章 腐败希瓦氏菌群体感应相关基因luxR及腐败相关基因csB、trxR筛选及验证
    2.1 前言
    2.2 材料与设备
        2.2.1 菌株及培养条件
        2.2.2 主要试剂
        2.2.3 主要设备
    2.3 方法
        2.3.1 菌株SP01的AHLs检测
        2.3.2 基因PCR扩增及序列分析
        2.3.3 菌株SP01 群体感应调控基因luxR及腐败相关基因csB、trxR的验证
        2.3.4 luxR基因的分析及其编码蛋白质
    2.4 结果与分析
        2.4.1 检测菌株SP01中AHLs信号分子
        2.4.2 菌株SP01群体感应调控基因luxR及腐败相关基因csB、trxR的验证
        2.4.3 luxR蛋白序列分析
    2.5 小结
第三章 外源信号分子AHLs对腐败希瓦氏菌AHL-QS系统表达情况的影响.
    3.1 前言
    3.2 材料与设备
        3.2.1 菌种与培养条件
        3.2.2 材料准备
        3.2.3 主要试剂及仪器
    3.3 材料与方法
        3.3.1 外源AHLs添加对菌株SP01生长的影响
        3.3.2 外源AHLs添加对菌株SP01蛋白酶活性的影响
        3.3.3 外源AHLs添加对菌株SP01运动性的影响
        3.3.4 外源AHLs添加对菌株SP01生物被膜的影响
        3.3.5 外源AHLs添加对菌株SP01luxR及腐败相关基因表达水平的影响
        3.3.6 外源AHLs对菌株SP01 受体蛋白luxR影响
        3.3.7 数据分析
    3.4 结果与分析
        3.4.1 外源AHLs对菌株SP01生长的影响
        3.4.2 外源AHLs对菌株SP01蛋白酶及运动性的影响
        3.4.3 外源AHLs对菌株SP01生物被膜的影响
        3.4.4 外源AHLs对菌株SP01QS及腐败相关基因表达水平的影响
        3.4.5 外源AHLs对菌株SP01luxR受体蛋白影响
    3.5 小结
第四章 荧光假单胞菌对腐败希瓦氏菌AHL-QS系统及致腐性的影响
    4.1 前言
    4.2 材料与仪器
        4.2.1 菌种及培养条件
        4.2.2 试剂
        4.2.3 仪器
    4.3 方法
        4.3.1 菌株PF08无细胞上清液(CFS)及菌体重悬液(CS)的制备
        4.3.2 菌株PF08CFS及CS对菌株SP01菌体密度的影响
        4.3.3 菌株PF08CFS及CS对菌株SP01蛋白酶和运动活性的影响
        4.3.4 菌株PF08CFS及CS对菌株SP01生物被膜形成的影响
        4.3.5 菌株PF08与菌株SP01共培养对菌株SP01活菌数的影响
        4.3.6 菌株PF08与菌株SP01共培养对菌株SP01蛋白酶和运动活性的影响
        4.3.7 菌株PF08与菌株SP01共培养对菌株SP01生物被膜形成的影响
        4.3.8 菌株PF08与菌株SP01共培养对AHLs活性的影响
        4.3.9 菌株PF08对菌株SP01QS及腐败基因表达水平的影响
        4.3.10 数据分析
    4.4 结果与分析
        4.4.1 菌株PF08CFS及CS对菌株SP01生长的影响
        4.4.2 菌株PF08CFS及CS对菌株SP01蛋白酶及运动活性的影响
        4.4.3 菌株PF08CFS及CS对菌株SP01生物被膜形成的影响
        4.4.4 菌株PF08与菌株SP01共培养对菌株SP01的影响
        4.4.5 菌株PF08对菌株SP01 luxR基因表达的影响
        4.4.6 菌株PF08对菌株SP01腐败相关基因表达的影响
    4.5 小结
第五章 腐败希瓦氏菌及其与荧光假单胞菌共培养对微冻和冷藏大菱鲆致腐能力的影响
    5.1 引言
    5.2 材料和方法
        5.2.1 材料
        5.2.2 仪器与设备
    5.3 方法
        5.3.1 无菌鱼块制备
        5.3.2 细菌菌悬液制备
        5.3.3接种与贮藏实验
        5.3.4 指标测定
        5.3.5 数据分析
    5.4 结果与分析
        5.4.1 菌落计数
        5.4.2 pH
        5.4.3 TBA
        5.4.4 GC-MS分析结果
    5.5 小结
第六章 总结、创新点和展望
    6.1 总结
    6.2 创新点
    6.3 展望
参考文献
硕士期间发表论文情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]2017年鲆鲽鱼养殖生产形势特点及建议[J]. 李凯,李鲁晶.  河北渔业. 2018(03)
[2]波罗的海希瓦氏菌AI-2/LuxS对生物被膜和致腐的调控[J]. 叶晓锋,严羽萍,唐蓉,朱军莉,高海春.  微生物学报. 2018(07)
[3]2012-2016年全球主要市场鲆鲽类产品市况综述[J]. 李可闻,冷传慧.  中国市场. 2017(34)
[4]不同水分活度降低剂对大菱鲆即食制品的影响[J]. 李敬,苏红,张晓梅,刘红英,齐凤生.  食品科学. 2017(22)
[5]投喂时间影响大菱鲆幼鱼的生长及类胰岛素样生长因子-Ⅰ基因的表达[J]. 王艺超,郑珂珂,徐后国,梁萌青.  动物营养学报. 2018(01)
[6]共培养沙门菌对粪肠球菌N41株生长特性及毒力基因的影响[J]. 武二丽,和春昊,金钺,刘玲玲,胡慧,曹晗,王亚宾,陈丽颖.  中国兽医学报. 2017(08)
[7]大菱鲆优势腐败菌的分离鉴定及其群体感应[J]. 杨兵,李婷婷,励建荣.  中国食品学报. 2017(07)
[8]产业集聚视角下我国大菱鲆养殖品牌建设分析[J]. 曹自强,杨正勇.  上海海洋大学学报. 2017(01)
[9]模拟常温物流下大菱鲆菌相变化规律与优势腐败菌鉴定[J]. 唐荣,张彩丽,孙博文,刘尊英.  食品工业科技. 2017(05)
[10]不同温度条件下养殖大菱鲆菌群变化和货架期预测[J]. 郭全友,包海蓉,何木,朱彦祺.  食品科学. 2017(11)

博士论文
[1]外源信号分子及肠道菌群对脆弱拟杆菌群体感应的影响[D]. 余道军.浙江大学 2012
[2]食源假单胞菌群体感应信号分子的产生及其对食品腐败的影响[D]. 綦国红.南京农业大学 2006

硕士论文
[1]基于DKP-LuxR的群体感应系统对Shewanella baltica腐败能力以及菌膜形成的调控研究[D]. 王飞飞.浙江工商大学 2018
[2]P.fluorescens和S.baltica共培养下生物被膜形成及互作机制研究[D]. 严羽萍.浙江工商大学 2018
[3]预制牛肉贮藏期间品质变化及微生物生长模型的建立[D]. 李凯利.浙江农林大学 2018
[4]大黄鱼腐败希瓦氏菌群体感应信号分子AHLs对其致腐性的影响及机制研究[D]. 张笑笑.浙江工商大学 2017
[5]基于群体感应分析腐败希瓦氏菌对副溶血弧菌毒力因子的影响机制[D]. 李灿.广东海洋大学 2016
[6]细菌共培养对猪源粪肠球菌生物学特性的影响[D]. 武二丽.河南农业大学 2016
[7]腐败希瓦氏菌致腐相关基因分析及群体感应信号分子对其调控作用的研究[D]. 刘娜娜.浙江工商大学 2015
[8]基于群体感应分析对虾优势腐败菌对副溶血弧菌毒力因子的影响[D]. 张煜琛.广东海洋大学 2015
[9]大黄鱼源希瓦氏菌的分离鉴定及菌株致腐能力差异机制初探[D]. 赵二科.浙江工商大学 2015
[10]茶多酚处理对冷藏大菱鲆的品质变化影响及其抑菌机理研究[D]. 刘剑侠.渤海大学 2014



本文编号：3390864