肠道菌群代谢产物SCFAs通过LAMTOR2调控巨噬细胞固有免疫介导杀菌作用及分子机制研究
发布时间：2021-09-08 15:12
肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae,K.p.）是最受关注的与抗生素耐药有关的病原体之一。多重耐药（multidrug-resistant,MDR）K.p.和泛耐药(extremely drug resistant（XDR）肠杆菌科细菌引起的感染急剧上升,由这些菌株引起的感染通常高死亡率、住院时间延长和费用增加。最近的研究表明,一些K.p.同时拥有毒力和多药耐药基因,并且可以垂直和水平传播,可在健康个体中引起高毒力且耐药的肺炎克雷伯菌克隆的出现。目前,我们对高毒力且耐药K.p.的独立及耐药传播路径及机体致病机制仍然不明了,从而使我们有必要更好地了解其感染微生物学,为开发针对K.p.感染制订新策略奠定基础。胃肠道的管腔内含有大量的微生物,小肠腔估计有103至109个细胞/m L,而大肠含有的细菌,其浓度可达1011至1012个细胞/g。作为一个整体,它构成了机体的一个动态平衡的生态系统。肠道微生物可以分解食物、促进肠腔营养的吸收和肠道发育的增强,从而提高饮食结构的多样化和人类的进化...
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：128 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
实验设计
安徽医科大学博士学位论文27多聚甲醛中，用于观察组织病理改变，肝脏右上叶和右肾迅速置于无酶EP管中过液氮后放于-80℃，用于后续实验。分别保存两份盲肠大便置于无酶EP管中，迅速过液氮后-80℃保存，分别用于后续16SrRNA粪便微生物检测和代谢产物检测。图2小鼠肺部解剖图Figure2Theanatomyinlungofmice注：1.尖叶；2.心尖；3.膈叶；4.副叶2.8.1.收集肺泡巨噬细胞小鼠充分麻醉放干血后，在超净工作台中使小鼠取仰卧位，消毒颈部毛发后，眼科剪剪剪开颈部皮肤，慢慢暴露气管，仔细分离气管后插入4.5号针头并用丝线固定针头，另一端接上1mL的注射器，取预冷1mL预冷PBS延气管注入，并轻柔按摩小鼠胸部，再小心吸出肺泡灌洗液（bronchoalveolarlavagefluid,BALF），回收率约90%，如此反复进行5次，灌洗液收集于10mL的离心管中，4℃、400g,离心5min吸取上清液，-80℃保存备用，将BALF管底沉淀细胞重悬于DMEM完全培养基(含10%胎牛血清、青霉素100U/ml链霉素100U/ml)中，于37℃、5%CO2细胞培养箱中培养1小时，轻轻倒去未贴壁细胞，贴壁的细胞即为肺泡巨噬细胞。2.8主要实验方法与技术2.8.2.小鼠鼻滴法细菌性肺炎模型建立
安徽医科大学博士学位论文34图3两组小鼠败血症表现。Control：肠道菌群正常组；MD：肠道菌群耗竭组Fig.3Septicemiaofmiceintwogroups.Control:normalgutmicrobiotagroup;MD:gutmicrobiotadepletiongroup随后，我们又比较了两组小鼠在感染肺炎克雷伯菌后肺组织和血液细菌负荷量，发现肠道菌群正常小鼠在感染肺炎克雷菌12h和24h后肺组织及血液（图4）含菌量明显比肠道菌群耗竭小鼠少。图4小鼠肺组织及血液细菌计数。MD：肠道菌群耗竭组(*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001)Fig.4Bacterialcountinlungandbloodofmice.MD:gutmicrobiotadepletiongroup(*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001)同时我们进一步比较了不同时期肺组织及肝脏、肾脏组织病理变化及组织评分，如图5所示，K.p.鼻滴法后成功建立小鼠急性肺损伤模型，病理改变主要包括炎症细胞浸润、肺血管内皮损伤出血、肺组织充血、肺泡间隔增厚/破坏及透明膜的形成，同时发现在感染后不同时间段肠道
【参考文献】：
期刊论文
[1]Dysregulation of gastric H,K-ATPase by cigarette smoke extract[J]. Muna Hammadi,Mohamed Adi,Rony John,Ghalia AK Khoder,Sherif M Karam. World Journal of Gastroenterology. 2009(32)
本文编号：3391011
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：128 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
实验设计
安徽医科大学博士学位论文27多聚甲醛中，用于观察组织病理改变，肝脏右上叶和右肾迅速置于无酶EP管中过液氮后放于-80℃，用于后续实验。分别保存两份盲肠大便置于无酶EP管中，迅速过液氮后-80℃保存，分别用于后续16SrRNA粪便微生物检测和代谢产物检测。图2小鼠肺部解剖图Figure2Theanatomyinlungofmice注：1.尖叶；2.心尖；3.膈叶；4.副叶2.8.1.收集肺泡巨噬细胞小鼠充分麻醉放干血后，在超净工作台中使小鼠取仰卧位，消毒颈部毛发后，眼科剪剪剪开颈部皮肤，慢慢暴露气管，仔细分离气管后插入4.5号针头并用丝线固定针头，另一端接上1mL的注射器，取预冷1mL预冷PBS延气管注入，并轻柔按摩小鼠胸部，再小心吸出肺泡灌洗液（bronchoalveolarlavagefluid,BALF），回收率约90%，如此反复进行5次，灌洗液收集于10mL的离心管中，4℃、400g,离心5min吸取上清液，-80℃保存备用，将BALF管底沉淀细胞重悬于DMEM完全培养基(含10%胎牛血清、青霉素100U/ml链霉素100U/ml)中，于37℃、5%CO2细胞培养箱中培养1小时，轻轻倒去未贴壁细胞，贴壁的细胞即为肺泡巨噬细胞。2.8主要实验方法与技术2.8.2.小鼠鼻滴法细菌性肺炎模型建立
安徽医科大学博士学位论文34图3两组小鼠败血症表现。Control：肠道菌群正常组；MD：肠道菌群耗竭组Fig.3Septicemiaofmiceintwogroups.Control:normalgutmicrobiotagroup;MD:gutmicrobiotadepletiongroup随后，我们又比较了两组小鼠在感染肺炎克雷伯菌后肺组织和血液细菌负荷量，发现肠道菌群正常小鼠在感染肺炎克雷菌12h和24h后肺组织及血液（图4）含菌量明显比肠道菌群耗竭小鼠少。图4小鼠肺组织及血液细菌计数。MD：肠道菌群耗竭组(*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001)Fig.4Bacterialcountinlungandbloodofmice.MD:gutmicrobiotadepletiongroup(*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001)同时我们进一步比较了不同时期肺组织及肝脏、肾脏组织病理变化及组织评分，如图5所示，K.p.鼻滴法后成功建立小鼠急性肺损伤模型，病理改变主要包括炎症细胞浸润、肺血管内皮损伤出血、肺组织充血、肺泡间隔增厚/破坏及透明膜的形成，同时发现在感染后不同时间段肠道
【参考文献】：
期刊论文
[1]Dysregulation of gastric H,K-ATPase by cigarette smoke extract[J]. Muna Hammadi,Mohamed Adi,Rony John,Ghalia AK Khoder,Sherif M Karam. World Journal of Gastroenterology. 2009(32)
本文编号：3391011
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