鲍曼不动杆菌OMVs调控树突状细胞参与抗感染的作用及机制

发布时间：2021-09-17 05:13

　　目的:细菌外膜囊泡（outer membrane vesicles,OMVs）含有大量的细菌性抗原并具有佐剂作用,能够有效地激活免疫系统,被誉为极具潜力的疫苗候选;当前,鲍曼不动杆菌引起的院内感染备受关注,多重耐药鲍曼不动杆菌更被视为“监护室的噩梦”,对住院病人构成极大威胁,也给医院内感染的控制带来了困难。本课题旨在分离鲍曼不动杆菌的OMVs,分析其对在天然和适应性免疫应答中均发挥重要作用的树突状细胞的调节作用,探讨鲍曼不动杆菌OMVs作为疫苗的作用机制及其用于防控鲍曼不动杆菌感染的可能性。方法:（1）鲍曼不动杆菌外膜囊泡的分离提取:常规培养细菌并经差速离心法分离细菌外膜囊泡,通过透射电镜分析、SDS-PAGE凝胶电泳和考马斯亮蓝染色等相关方法进行细菌外膜囊泡鉴定。（2）细菌外膜囊泡刺激浓度的确定:将分离的细菌外膜囊泡进行系列稀释,取不同浓度的外膜囊泡处理髓源性树突状细胞,MTT法检测细胞的存活率,以不影响树突状细胞存活率的最高细菌囊泡用量确定为拟用刺激浓度（10μg/mL）。（3）鲍曼不动杆菌外膜囊泡刺激的髓源树突状细胞功能分析:经确定浓度的（10μg/mL）外膜囊泡处理髓源性树突状... 

【文章来源】：江苏大学江苏省

【文章页数】：93 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

细菌外膜囊泡结构[33]

鲍曼不动杆菌OMVs调控树突状细胞参与抗感染的作用及机制6T细胞活化、促进B细胞增殖并分泌无关抗体等作用，这些作用将抑制宿主免疫功能，促进细菌的生存与发展。因此，使用合适的技术或方法来修饰细菌外膜囊泡从而使之发挥有效的免疫保护作用，是细菌外膜囊泡研究的关键。同时，由于不同细菌外膜囊泡产生免疫调节作用的非均一性和复杂性，给细菌外膜囊泡的疫苗研究提出了挑战。然而，细菌外膜囊泡的佐剂效应，却激发了外膜囊泡疫苗研究的兴趣和希望。图1.2细菌外膜囊泡的抗原提呈给免疫细胞的模式图[33]Figure1.2Amodelforoutermembranevesiclesantigenpresentationtoimmunecells[33]1.3.4细菌外膜囊泡的临床应用前景对于免疫细胞来说，细菌外膜囊泡属于外来的异物。因此，宿主体内的免疫细胞会快速对其作出响应，包括巨噬细胞的吞噬清除、相关固有免疫细胞分泌炎症因子和趋化因子[73-75]。大量文献报道，细菌外膜囊泡免疫小鼠后会刺激小鼠体内产生针对外膜囊泡的特异性抗体，这种适应性免疫应答的产生，对于宿主抗病原体感染具有重要的现实意义[76-78]。就目前的研究与应用现状而言，除了基于脑膜炎奈瑟菌外膜囊泡研制的疫苗被应用于人体治疗实践，并取得了良好的治疗效果外[76]，其它各种细菌外膜囊泡由于自身存在的多种局限性，并未应用于人体感

鲍曼不动杆菌OMVs调控树突状细胞参与抗感染的作用及机制85使用ELISA检测技术和PCR技术检测外膜囊泡处理后髓源性树突状细胞分泌功能和相关细胞因子的mRNA表达情况。6使用磁珠分选技术和流式细胞技术检测外膜囊泡处理后的髓源性树突状细胞对初始T细胞增殖分化的影响。图1.3体外实验Figure1.3Experimentinvitro（2）体内实验部分（图1.4）：第一部分，按照实验流程对小鼠进行外膜囊泡的免疫，每周一次共三次，最后一次免疫后三天断颈处死小鼠后，取出脾脏进行研磨，通过流式细胞术和ELISA检测技术进行相关指标的检测分析。第二部分，分别以不同浓度的鲍曼不动杆菌尾静脉注射进入小鼠体内，监测小鼠的生存情况，从而确定合适的感染浓度。第三部分，使用两种不同的外膜囊泡分别免疫小鼠，每周一次共三周。于第四周，分别尾静脉注射合适浓度的鲍曼不动杆菌，监测小鼠的生存情况，绘制生存曲线。


本文编号：3398037