RCC1协同PALB2参与DNA损伤修复分子机制的研究

发布时间：2021-09-17 18:19

　　尽管细胞DNA每天受到来自内源和环境中一些因素的不断攻击,人体基因并未成为一堆乱码信息或降解。为了应对这种威胁,生命体已经发展了多种系统来检测DNA损伤,发出信号并介导其修复,从而使人体能够恢复DNA的完整性和保真度,并保持基因组的遗传稳定性。DNA修复途径的破坏或失控会导致基因组不稳定,因此,阐明DNA损伤修复的机制对于维持基因组稳定性和遗传信息的完整性至关重要。细胞周期进程和DNA损伤修复共同帮助细胞内遗传物质的稳定。PALB2（Partner And Localizer Of BRCA2）是重要的乳腺癌抑制因子,作为BRCA2的协同因子,帮助BRCA2定位在DNA损伤位点。PALB2作为核心蛋白连接BRCA1和BRCA2,促进同源重组修复（HR）。RCC1（Regulator Of Chromosome Condensation 1）,染色质浓缩调控因子1,与核小体上的H2A/H2B结合,参与S晚期和M早期的染色质凝聚。DNA损伤应答（DDR）中许多损伤修复因子发挥作用和细胞周期进程依赖Ran-GTPase调节的核质交换（NCT）,RCC1是Ran唯一的鸟嘌呤交换因子,与Ran结... 

【文章来源】：上海师范大学上海市

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

RCC1与PALB2内源性相互作用

第2章RCC1可以与PALB2相互作用上海师范大学硕士学位论文26图2-1RCC1与PALB2内源性相互作用293T细胞裂解之后，向细胞裂解液中分别加入ProteinAAgarose或ProteinGAgarose，之后分别加入PALB2或者RCC1或者IgG抗体，4℃摇床孵育过夜进行内源CoIP,并用PALB2、RCC1和β-actin抗体进行免疫印迹分析。图2-2RCC1与PALB2外源性相互作用准备3盘293T细胞，一盘293T细胞转染SBP-RCC1质粒，培养24h后进行细胞裂解。向细胞裂解液中分别加入SProteinAgarose或ProteinGAgarose，向加入ProteinGAgarose的细胞裂解液加入IgG抗体，4℃摇床孵育过夜进行外源CoIP,并用PALB2抗体进行免疫印迹分析，Flag抗体检测SBP-RCC1在细胞内的表达情况。2.5本章小结之前的研究表明RCC1在细胞生理过程具有十分重要的作用。RCC1可以与Ran结合，促进Ran-GDP转换成Ran-GTP，参与到有丝分裂细胞中染色体分离，有丝分裂纺锤体的形成，核质间物质运输，核膜的重塑等生理过程。RCC1可以通过调节Ran-GTP水平调控细胞周期和DNA损伤反应。RCC1与核小体上的H2A/H2B结合，参与S晚期和M早期的染色质凝聚。PALB2是同源重组修复中的关键蛋白,作为BRCA2的协同因子，帮助BRCA2定位在DNA损伤位点并且

第3章RCC1与PALB2相互作用的关键区域上海师范大学硕士学位论文30图3-1RCC1缺失突变体示意图表3-1缺失突变体及磷酸化位点突变引物序列RCC1-D1-FATGTCACCCAAGCGCATATCAGTGGAGGGCTCGGAGRCC1-D1-RCTCCGAGCCCTCCACTGATATGCGCTTGGGTGACATRCC1-D2-FGCCCTGGGAAGGGACACACAGGGCCAGCTAGGCCGTRCC1-D2-RACGGCCTAGCTGGCCCTGTGTGTCCCTTCCCAGGGCRCC1-D3-FACCTTGGGCTGCGGGGAATGGGTGGGCTTCTCTGGTRCC1-D3-RACCAGAGAAGCCCACCCATTCCCCGCAGCCCAAGGTRCC1-D4-FAATTCCACCAAGTCCTAGGTGGGCTTCTCTGGTRCC1-D4-RACCAGAGAAGCCCACCTAGGACTTGGTGGAATTRCC1-S2A-FTTCTGCAGTCGACGGATGGCACCCAAGCGCATAGCRCC1-S2A-RGCTATGCGCTTGGGTGCCATCCGTCGACTGCAGAARCC1-S11A-FCATAGCTAAAAGAAGGGCCCCCCCAGCAGATGCRCC1-S11A-RGCATCTGCTGGGGGGGCCCTTCTTTTAGCTATG


本文编号：3399261