新型细菌源α-L-鼠李糖苷酶挖掘及其生物转化应用

发布时间：2021-09-24 16:51

　　α-L-鼠李糖苷酶（α-L-rhamnosidase,E.C.3.2.1.40）是一类糖苷水解酶,可通过专一性水解黄酮类化合物末端的α-L-鼠李糖基从而提高其生物利用率及生物学活性。α-L-鼠李糖苷酶作为一类生物催化剂,有广泛的应用前景。目前已表征的细菌源GH78家族α-L-鼠李糖苷酶仅有19个,有关其在生物催化应用方面的报道主要集中在真菌,因此,新型细菌源α-L-鼠李糖苷酶资源的挖掘及其对天然黄酮糖苷的生物转化研究具有重要意义。本研究首先利用基因组信息挖掘新酶发现策略,从解肝磷脂土地杆菌基因组中得到三个α-L-鼠李糖苷酶基因PhRha78D、PhRha78E和PhRha78G,通过传统的双酶切连接法构建于表达载体pET-28a,转入大肠杆菌BL21（DE3）进行异源表达,SDS-PAGE及酶活检测结果表明,PhRha78D、PhRha78E、PhRha78G大部分以催化活性包涵体形式异源表达。PhRha78D酶活力较低,仅对PhRha78E和PhRha78G进行了酶学特性研究,二者的最适pH分别为6.5和7.0,但最适反应温度却相差很大,分别为60 ^oC和40 ... 

【文章来源】：山西大学山西省

【文章页数】：101 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

芦丁、柚皮苷和橙皮苷分子结构

图 2.1 α-L-鼠李糖苷酶基因 PhRha78 的 PCR 扩增结果Fig. 2.1 PCR amplification of α-L-rhamnosidase genes PhRha78A)、(B)、(C)图中的泳道 2 分别代表 PhRha78D、PhRha78E 和 PhRha78G 的 PCR 产表示 DNA Marker。Lane 2 in (A), (B), and (C) are the PCR products of PhRha78D, PhRha78E, and PhRhavely. Lane M is DNA Marker..2.2 菌落 PCR 鉴定PhRha78D、PhRha78E、PhRha78G 的阳性克隆分别应该在约 2900 bp、240 bp 处存在单一条带。阳性克隆 PCR 鉴定结果图 2.2-2.4 表明，其阳性克 4 个、3 个、4 个。分别选择两个阳性克隆送去测序，测序结果显示，目酸序列与其理论序列相一致，表明三个目的基因分别成功插入至表达载体]。

图 2.2 PhRha78D 阳性克隆 PCR 鉴定结果Fig. 2.2 Identification for positive clones PCR of PhRha78D

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3408104