利用CRISPR/Cas9系统构建人HIF-1α基因敲除细胞株

发布时间：2021-09-27 19:25

　　在人源HIF-1α的PAS结构域内设计特异性靶点,构建Cas9-gRNA-HIF-1α敲除质粒,并将其转染至细胞后经嘌呤霉素筛选出21个单克隆细胞株,随后通过酶切、测序分析及下游基因验证等方法检测,最后得到一株特异性敲除HIF-1α的纯合子细胞（H20）。所设计的靶点能够有效地编辑HIF-1α,将为在其他细胞中通过CRISPR/Cas9系统特异性敲除HIF-1α提供方法借鉴。与此同时,也将为后续揭示HIF-1在由正常排卵事件演变成卵巢肿瘤过程中的作用机制奠定基础。 

【文章来源】：生物学杂志. 2020,37(06)北大核心CSCD

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

sgRNA选取与质粒的构建

为进一步验证H20细胞中HIF-1α蛋白的表达情况,用氯化钴处理野生型(HIF-1α+/+)和敲除细胞(HIF-1α-/-)。免疫印迹结果(图3)显示,氯化钴可明显诱导野生型细胞中的HIF-1α。然而,与正常细胞相比,H20细胞中HIF-1α几乎不表达,这说明H20细胞是HIF-1α缺失的稳定细胞株。图3 H20细胞中HIF-1α的蛋白表达情况

H20细胞中HIF-1α的蛋白表达情况

【参考文献】：
期刊论文
[1]卵巢低氧微环境调节哺乳动物排卵的分子机制[J]. 杨芳,张宝云,冯光德,向伟,马云霞,陈航,储明星,王凭青.  遗传. 2016(02)



本文编号：3410492