家蝇乙酰胆碱酯酶基因密码子优化及酶学特性表征
发布时间：2021-09-28 11:45
基于密码子通用性及不同物种密码子使用频率差异原则,对家蝇乙酰胆碱酯酶的基因序列进行优化,旨在提高其在毕赤酵母中的表达量,增强其应用前景。将基因序列中的低频密码子更换为毕赤酵母偏好的密码子,同时调整乙酰胆碱酯酶各区段GC含量至45%～55%。将优化的家蝇乙酰胆碱酯酶连接至表达载体pPIC9K并转入毕赤酵母GS115中,摇瓶培养。以改进的Ellman法测定重组家蝇乙酰胆碱酯酶（mdAchE）酶学性质,通过有机磷及氨基甲酸酯类农药抑制试验分析重组酶mdAchE的生物活性。家蝇乙酰胆碱酯酶密码子优化后在毕赤酵母中实现高效表达,酶活力约8.82 U/mL。抑制试验显示,重组酶mdAchE能够被马拉硫磷等7种有机磷农药,克百威等8种氨基甲酸酯类农药抑制,最低抑制浓度IC15值为1.83×10-15μg/mL,远远低于其它诸如气相色谱法、生物传感器等方法测得的最低检测限(0.01μg/mL,4.14×10-6μg/mL)。本试验结果表明,重组乙酰胆碱酯酶mdAchE在有机磷及氨基甲酸酯类农药残留的检测领域具有较大的应用潜力。
【文章来源】：中国食品学报. 2020,20(12)北大核心EICSCD
【文章页数】：9 页
【部分图文】：
重组乙酰胆碱酯酶md Ach E SDS-PAGE电泳分析
图1 重组乙酰胆碱酯酶md Ach E SDS-PAGE电泳分析图2a、图2b显示，重组酶md Ach E在20～80℃有活力，在50℃和65℃酶活力相当，其最适反应温度为60℃。在50,60,70℃3个温度处理下的前20 min其酶活力均下降得非常明显，在50℃处理1 h,md Ach E酶活性损失了50%；在60℃处理1 h后，md Ach E相对酶活损失了60%;70℃处理1 h,md Ach E酶活性仅剩38%。
【参考文献】：
期刊论文
[1]液相色谱-质谱联用快速检测果蔬汁中12种氨基甲酸酯类农药残留[J]. 李艳芳,黄志波,何健安,胡楚维,钟鸣,徐匆. 安徽农业科学. 2018(17)
[2]速测卡法快速检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留[J]. 谢俊平,李慧琴,梁科,卢新. 食品安全质量检测学报. 2018(06)
[3]SPE-GC法联用快速检测果蔬中的有机磷农药残留[J]. 郭团玉,谢友亮,陈媛梅,陈峰. 楚雄师范学院学报. 2017(06)
[4]中华蜜蜂乙酰胆碱酯酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达鉴定[J]. 曹雪,陈占宽,白仲虎,杨艳坤,陈继峰. 食品与生物技术学报. 2016(12)
[5]有机溶剂对中国明对虾体壁N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响[J]. 林娟娟,朱秋香,林建城. 福建农业学报. 2015(12)
[6]有机磷农药对人类健康的影响及农药残留检测方法研究进展[J]. 俞发荣,李登楼. 生态科学. 2015(03)
[7]酶抑制法测定多种氨基甲酸酯类农药残留的试验[J]. 罗俊霞,李德瑜,袁小伟,赵建波. 山东化工. 2015(02)
[8]基于酶抑制法的农药残留快速比色检测[J]. 朱松明,周晨楠,和劲松,张雪吟,郭希山. 农业工程学报. 2014(06)
[9]家蚕乙酰胆碱酯酶基因bmace在毕赤酵母GS115中的表达及其分析[J]. 何永盛,陈舒迟,王弘,韩双艳,杨琼,刘细霞,董洁娴,杨武英,孙远明. 中国农业科学. 2012(11)
[10]菓菠萝蛋白酶的分子构象与活力变化的研究[J]. 陈清西,颜恩旭. 生物化学杂志. 1991(03)
博士论文
[1]嗜热微生物来源的甘露聚糖酶的克隆表达、热稳定性及催化机理的研究[D]. 卢海强.中国农业科学院 2013
硕士论文
[1]二硫键异构酶过表达对家蚕乙酰胆碱酯酶在毕赤酵母中表达的作用研究[D]. 卢临萍.华南农业大学 2016
[2]拟环纹豹蛛乙酰胆碱酯酶功能验证与新乙酰胆碱酯酶基因克隆[D]. 李纯睿.南京农业大学 2016
[3]家蝇乙酰胆碱酯酶基因的重组表达[D]. 王栋.天津科技大学 2012
[4]果蝇乙酰胆碱酯酶基因在毕赤酵母中的表达[D]. 徐瑶.重庆大学 2006
本文编号：3411836
【文章来源】：中国食品学报. 2020,20(12)北大核心EICSCD
【文章页数】：9 页
【部分图文】：
重组乙酰胆碱酯酶md Ach E SDS-PAGE电泳分析
图1 重组乙酰胆碱酯酶md Ach E SDS-PAGE电泳分析图2a、图2b显示，重组酶md Ach E在20～80℃有活力，在50℃和65℃酶活力相当，其最适反应温度为60℃。在50,60,70℃3个温度处理下的前20 min其酶活力均下降得非常明显，在50℃处理1 h,md Ach E酶活性损失了50%；在60℃处理1 h后，md Ach E相对酶活损失了60%;70℃处理1 h,md Ach E酶活性仅剩38%。
【参考文献】：
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[5]有机溶剂对中国明对虾体壁N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响[J]. 林娟娟,朱秋香,林建城. 福建农业学报. 2015(12)
[6]有机磷农药对人类健康的影响及农药残留检测方法研究进展[J]. 俞发荣,李登楼. 生态科学. 2015(03)
[7]酶抑制法测定多种氨基甲酸酯类农药残留的试验[J]. 罗俊霞,李德瑜,袁小伟,赵建波. 山东化工. 2015(02)
[8]基于酶抑制法的农药残留快速比色检测[J]. 朱松明,周晨楠,和劲松,张雪吟,郭希山. 农业工程学报. 2014(06)
[9]家蚕乙酰胆碱酯酶基因bmace在毕赤酵母GS115中的表达及其分析[J]. 何永盛,陈舒迟,王弘,韩双艳,杨琼,刘细霞,董洁娴,杨武英,孙远明. 中国农业科学. 2012(11)
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博士论文
[1]嗜热微生物来源的甘露聚糖酶的克隆表达、热稳定性及催化机理的研究[D]. 卢海强.中国农业科学院 2013
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[1]二硫键异构酶过表达对家蚕乙酰胆碱酯酶在毕赤酵母中表达的作用研究[D]. 卢临萍.华南农业大学 2016
[2]拟环纹豹蛛乙酰胆碱酯酶功能验证与新乙酰胆碱酯酶基因克隆[D]. 李纯睿.南京农业大学 2016
[3]家蝇乙酰胆碱酯酶基因的重组表达[D]. 王栋.天津科技大学 2012
[4]果蝇乙酰胆碱酯酶基因在毕赤酵母中的表达[D]. 徐瑶.重庆大学 2006
本文编号：3411836
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