联合调控Wnt和BMP信号通路促进人源诱导多能干细胞分化为心肌细胞的实验研究

发布时间：2021-09-28 16:37

　　目的探讨联合调控Wnt和BMP信号通路在人源诱导多能干细胞（human induced pluripotent stem cells,hiPSCs）分化为心肌细胞中的作用。方法复苏hiPSCs培养,倒置相差显微镜下观察细胞形态,免疫荧光染色鉴定多能性标记物OCT3/4、NANOG和TRA-1-60表达;传代培养hiPSCs,取35代以内细胞进行后续实验。待细胞融合接近100%时开始分化（记为分化第0天）,加入Wnt通路激活剂CHIR99021。于分化第3天加入不同浓度的IWP4（Wnt通路抑制剂）,实时荧光定量PCR检测心肌细胞特异性标记物肌钙蛋白T（troponin T,TNNT2）mRNA表达,筛选IWP4最佳浓度;在不同时间点加入最佳浓度IWP4,通过比较TNNT2 mRNA表达筛选最佳作用时间。然后,在加入CHIR99021和IWP4基础上于分化第5天加入不同浓度BMP-4以及不同时间点加入BMP-4,通过检测TNNT2 mRNA表达筛选BMP-4最佳浓度及最佳作用时间。最后,将hiPSCs分为3组,Wnt调控组、BMP调控组和Wnt+BMP联合调控组,在分化第0天加入CHIR... 

【文章来源】：中国修复重建外科杂志. 2020,34(10)北大核心CSCD

【文章页数】：9 页

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3412278