丝状真菌天冬氨酸蛋白酶的自激活机制与热稳定性改良研究

发布时间：2021-09-30 23:25

　　天冬氨酸蛋白酶又称酸性蛋白酶,在食品、发酵、饲料、医药和皮革等行业广泛应用。但这类蛋白酶的热稳定性通常较差,限制了它的应用。因此,发掘高温天冬氨酸蛋白酶资源或通过分子改良提高其热稳定性,对研究天冬氨酸蛋白酶的稳定性机制、拓宽其应用范围具有重要意义。本文从具有不同特性（嗜酸、耐热、低温等）的丝状真菌Talaromyces leycettanus JCM12802、Thermoascus crustaceus JCM 12803、Bispora sp.MEY-1和Penicillium sp.JJ-1中克隆了6个天冬氨酸蛋白酶基因（Tlap、Tlapa1、Tcapa、Bsapa、Psapa和Psapb）并成功地在毕赤酵母中进行了表达。6个重组蛋白酶（TlAP、TlAPA1、TcAPA、BsAPA、PsAPA和PsAPB）的最适pH多在3.0?3.5之间,在pH 2.0?4.0的条件下具有高催化活力,它们能够在酸性条件下保持稳定,其中来源于嗜酸菌Bisporasp.MEY-1的BsAPA在酸性条件的稳定性最好。这6个天冬氨酸蛋白酶活性和稳定性受温度的影响差异很大,来源于Penicillium... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：105 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

天冬氨酸蛋白酶的结构特点(Nascimentoetal.,2008)

8图 1-2 天冬氨酸蛋白酶的催化机理 (Yegin and Dekker, 2013)Fig.1-2 Catalytic mechanism of aspartic protease普遍认为，天冬氨酸蛋白酶的催化机理是催化残基通过激活水分子形成亲核试剂，然后攻击

这种解折叠往往是可逆的；因此可以用来测量其热力学稳定性 (图1-3)。1.3.2 影响酶热稳定性的因素当前关于嗜热酶的报道已有很多，而且越来越多的学者致力于嗜热酶的结构研究，并试图破译高温适应性的关键因素。初步研究发现影响酶热稳定性的因素很多，而不同酶之间也存有差异。酶的热稳定性更多时候并非单一因素决定的，往往是多种不同效应累加的结果。因此，尽管当前人们对这一领域进行了广泛的研究，但是并没有形成成熟的理论体系。近来，一些与嗜热酶热稳定性相关的结构特征被提出，这也为通过蛋白质工程提高酶的热稳定性提供了思路。1.3.2.1 内在因素


本文编号：3416828