睾丸酮丛毛单胞菌中MBD的生物学作用及调控研究

发布时间：2021-10-15 16:51

　　内消旋-丁二醇脱氢酶（Meso-butanediol dehydrogenase,MBD）是睾丸酮丛毛单胞菌（Comamonas testosteroni,C.T.）ATCC11996中的一种酶。因其能够催化反应产生大量的乙偶姻（Acetoin,AC）和内消旋-2,3-丁二醇（Meso-2,3-butanediol,meso-2,3-BD）生物产物,成为专家学者关注的热点。本文以MBD为研究对象,探索该酶在睾丸酮丛毛单胞菌中对甾体类激素代谢的影响及基因调控情况。通过激素诱导、总RNA提取、全转录组测序、测序信息比对、基因扩增、构建基因表达载体、外源蛋白表达、蛋白质亲和层析纯化、基因敲除、质粒共转化、高效液相、ELISA等实验方法,结果表明:经睾丸酮诱导后的C.T.菌中共有4835个基因在转录水平发生了差异,有110个显著差异基因,其中MBD基因差异Log2值达到1.80,与未诱导前差异达3.48倍。通过构建MBD敲除型C.T.株,并使用高效液相色谱法检测其对于睾丸酮、甲睾酮、雌酮、雌二醇等甾体类激素的降解能力,研究表明将C.T.菌中的内消旋-丁二醇脱氢酶基因敲除后对睾丸酮的降解率为27... 

【文章来源】：长春理工大学吉林省

【文章页数】：116 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

MBD参与的主要反应Fig1.1ThemainreactionofMBDparticipation

9图 2.3 信息分析流程图Figure 2.3 InformationAnalysis Flow Chart2.3 实验结果2.3.1 C.T.菌生长曲线每 1 h 取 1 mL 菌液在 600 nm 波长下测定其吸光度结果如表 2-3 所示。表 2-3 菌液吸光度Table 2-3 Bacterial absorbance培养时间（h）CT1（OD） CT2（OD） CT （OD） T1（OD） T2（OD） T（OD）0 0.134 0.138 0.136 0.138 0.138 0.1381 0.124 0.122 0.123 0.130 0.132 0.1312 0.145 0.143 0.144 0.142 0.144 0.143

图 2.4 clean reads 的碱基含量分布Figure 2.4 base content distribution of clean readsX 轴代表碱基在 read 中的位置，Y 轴为碱基的比例，不同颜色代表不同的碱基类型。图中6bp 的波动为正常现象。

【参考文献】：
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本文编号：3438306