溶原性芽孢杆菌噬菌体的生物学特性及其灭活方法

发布时间：2021-10-18 15:37

　　芽孢杆菌以其独特的益生特性被应用于各个行业,但部分芽孢杆菌菌株中存在前噬菌体,易被紫外线或丝裂霉素等外界因素诱导转变为烈性噬菌体,从而影响菌株的生长以及工业化生产,进而造成巨大的损失。因此,本实验通过不同的方法诱导一株溶源性芽孢杆菌,以得到的噬菌体为研究对象,对其形态特征、生物学特性、环境因素对吸附能力的影响,以及温度与化学试剂对该噬菌体的灭活效果进行了研究。结果如下:（1）该溶原性芽孢杆菌噬菌体的最佳诱导方法是在距紫外灯（254nm）10-15cm处照射40s。经透射电镜观察该芽孢杆菌噬菌体（B1）属于肌尾噬菌体科。该噬菌体的最佳感染复数为10,潜伏期为45min,之后进入裂解期,在105min时进入平稳期,裂解量平均为104.48±2.70PFU。（2）温度与pH值对该噬菌体影响较大。在pH值为2和3时,噬菌体B1完全失活。当温度为0°C时,存活率仅有19.37%。而温度为36℃时,噬菌体B1的存活率达到90.22%。（3）pH值对噬菌体B1的吸附率影响较小,在pH 5-9时,噬菌体B1的吸附率在90%以上。温度为0℃-36℃时,对噬菌体B1的吸附能力没有明显影响,其吸附率均可达到... 

【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２?菌株１６Ｓ?ｒＤＮＡ系统发育分析??

图３?紫外诱导甲基营养型芽孢杆菌??Ｆｉｇｕｒｅ．３?Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ?ｉｎｄｕｃｅｄ?Ｂａｃｉｌｌｕｓ?ｍｅｔｈｙｌｏｔｒｏｐｈｉｃ??紫外诱导原噬菌体释放是溶源性噬菌体诱导的常规方法之一［４６］。图３??显示了溶原性甲基营养型芽孢杆菌菌悬液经过紫外（２５４ｎｍ）照射不同时??间后，培养期６ｈ内菌液ＯＤ６〇〇值的变化情况。由图可知，照射４０ｓ时溶原??性甲基营养型芽孢杆菌诱导液的〇Ｄ６〇０值变化比较平稳；当照射３０ｓ时溶??原性甲基营养型芽孢杆菌的诱导液〇Ｄ＿值呈下降趋势；照射２０ｓ时溶原??性甲基营养型芽孢杆菌的诱导液〇〇＿值呈先下降然后平稳的趋势；照射??１０ｓ时溶原性甲基营养型芽孢杆菌的诱导液ＯＤ６Ｇ（）值呈先上升然后下降的??趋势。??２００５年，金雨华通过对溶源性乳酸菌紫外诱变前后生长特性的初步研??宄结果显示，嗜热链球菌在１５Ｗ紫外灯下，在３０ｃｍ处照射诱导９０ｓ后进??行培养，细菌的〇Ｄ６〇（）值总是低于对照样的ＯＤ６〇（）值。由此可以判断，菌??体中的温和噬菌体经过紫外诱变转变为烈性噬菌体［４７］。２００２年，Ｗｏｏｄｓ等??将５．?菌株在２５４ｎｍ紫外灯下在距离２５ｃｍ处照射２０ｓ后，通??过双层平板实验结果产生清晰的斑块噬菌体［４８］。Ｈｅｎｓ等在２００５年对??ＤＲ１１菌株进行紫外线诱导，测定其噻菌体的效价为??２．３Ｍ〇８ＰＦＵ／ｍＬ。透射电镜显示该噬菌体的形态为六角形头部

很多研究采用丝裂霉素作为溶源性噬菌体的诱变剂，也被认为是最简??单易行的诱导手段［５°］。本研究采用不同浓度的丝裂霉素对溶原性甲基营养??型芽孢杆菌培养液进行诱导，结果如图所示。由图４可知，利用０．５ｐｇ／ｍＬ??和ｌＵｇ／ｍＬ丝裂霉素诱导溶原性甲基营养型芽孢杆菌时，其培养液的ＯＤ６００??值都有下降趋势，但是ｌｐｇ／ｍＬ丝裂霉素比０．５｜＿ｉｇ／ｍＬ下降的快，推测是噬??菌体的出现导致溶原性甲基营养型芽孢杆菌培养液的〇Ｄ６〇〇值下降。取诱??导后的溶原性甲基营养型芽孢杆菌上清液，以实验菌株甲基营养型芽孢杆??菌为宿主菌进行双层平板实验，结果显示培养基平板上没有噬菌斑的出现。??２０１１年，Ｌｅｅ等利用Ｕｉｇ／ｍＬ的丝裂霉素Ｃ诱导蜡状芽孢杆菌２５０，并??获得温和噬菌体Ｔｐ２５０。通过分析温和噬菌体Ｔｐ２５０核苷酸序列，已知ＯＦＲ??

【参考文献】：
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硕士论文
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本文编号：3443053