素馨属植物ISSR-PCR反应体系的建立和优化

发布时间：2021-10-30 16:28

　　为了确定素馨属植物ISSR-PCR反应的最佳体系,以素馨属植物叶片为材料,采用单因素试验和正交试验设计2种方法对影响素馨属ISSR-PCR反应中的dNTPs、Taq DNA聚合酶、引物、模板DNA以及Mg²⁺ 5个因素进行4个水平的优化试验,通过试验建立了素馨属25μL最佳反应体系:dNTPs浓度为0.10 mmol/L、Taq DNA聚合酶用量2.5 U、引物浓度为0.7μmol/L、模板DNA用量为2.5 ng、Mg²⁺浓度为1.0 mmol/L。在最佳反应体系下,从100条ISSR引物中筛选出了8条ISSR引物,并确定了各引物的最佳退火温度。利用29份素馨属材料进行最佳反应体系的验证,结果表明,该优化体系扩增条带清晰,稳定性高,重复性好,表明该反应体系适用于素馨属植物ISSR分子标记的研究。本研究可为素馨属植物遗传多样性以及亲缘关系等方面的研究提供参考依据。 

【文章来源】：江苏农业科学. 2020,48(23)

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验材料
    1.2 试验方法
        1.2.1 供试材料DNA提取与检测
        1.2.2 ISSR-PCR反应体系单因素筛选试验
        1.2.3 ISSR-PCR反应体系正交试验设计
        1.2.4 引物及其退火温度的筛选
        1.2.5 ISSR-PCR最佳体系的验证
2 结果与分析
    2.1 单因素试验优化结果
        2.1.1 dNTPs浓度对ISSR-PCR扩增体系的影响
        2.1.2 Taq DNA聚合酶用量对ISSR-PCR扩增体系的影响
        2.1.3 引物浓度对ISSR-PCR扩增体系的影响
        2.1.4 模板DNA用量对ISSR-PCR扩增体系的影响
        2.1.5 Mg2+浓度对ISSR-PCR扩增体系的影响
    2.2 正交试验设计琼脂糖凝胶电泳结果
    2.3 正交试验设计琼脂糖凝胶电泳结果图直观评分
    2.4 正交设计试验因素内各处理水平对PCR扩增结果的影响
        2.4.1 dNTPs浓度对PCR扩增体系的影响
        2.4.2 Taq DNA聚合酶用量对PCR扩增体系的影响
        2.4.3 引物浓度对PCR扩增体系的影响
        2.4.4 Mg2+浓度对PCR扩增体系的影响
        2.4.5 模板DNA用量对PCR扩增体系的影响
    2.5 引物及其退火温度的筛选
    2.6 优化后ISSR-PCR反应体系稳定性检测
3 讨论与结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]茉莉花磷酸甲羟戊酸激酶基因克隆及表达分析[J]. 陈笛,王鹏杰,郑玉成,郑知临,陈桂信,叶乃兴.  南方农业学报. 2018(10)
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[3]茉莉花JsPAL2基因的克隆与表达分析[J]. 熊青,宋姣敏,崔萌,许颖妍,俞滢,叶乃兴,陈桂信.  热带作物学报. 2018(07)
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[5]基于ISSR分子标记的郁金香品种遗传多样性分析[J]. 巨秀婷,阿啟兰,侯志强,蒋福娟.  基因组学与应用生物学. 2017(07)
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[7]基于ISSR标记的20种荷花品种资源遗传多样性分析[J]. 何天友,沈少炎,瞿印权,陈凌艳,刘颖嘉,荣俊冬,郑郁善.  安徽农业科学. 2017(06)
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[9]黔产宽叶缬草ISSR反应体系的建立与优化[J]. 钱志瑶,周道堂,黄秀平,周镁,陈祖云,覃容贵.  生物技术通报. 2015(07)
[10]葡萄种质资源ISSR-PCR反应体系的建立与优化[J]. 代培红,朱瑜,姚正培,李玮璐,马丽,罗淑萍.  南方农业学报. 2013(08)

硕士论文
[1]基于形态性状和ISSR标记的朱顶红品种遗传多样性分析及ISSR指纹图谱构建[D]. 张林.南京农业大学 2012
[2]武陵山区茶树种质资源遗传多样性和亲缘关系的ISSR分析[D]. 卢莉.南京农业大学 2009



本文编号：3467055