青鱼TANK基因的克隆及功能初探
发布时间：2022-10-09 12:20
鱼类养殖在我国水产养殖业中占有举足轻重的地位。青鱼是我国“四大家鱼”之一,是我国重要的淡水养殖鱼类;但是病原微生物诸如病毒对青鱼养殖业构成了严重威胁。鱼类同时拥有先天免疫系统和获得性免疫系统;然而其主要依赖先天免疫系统来抵抗病原微生物的侵染。因此,研究青鱼抗病毒先天免疫机制对于青鱼的疾病防控和健康养殖具有重要的意义。本研究克隆了青鱼TRAF家族相关NF-κB基因活化因,对青鱼子（the） TANKTRAF基因进family行了重组表达及功member-associated能分析NF-κB a,为系统ctivator,阐明青TANK+ê鱼的先天免疫系统提供了重要数据。具体研究结果如下:在哺乳动物中,TANK与NF-κB转...
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
1.1 鱼类免疫系统
1.2 RLR信号通路的简介
1.3 TANK的研究概况
1.4 本论文研究目的、内容及意义
第二章 实验材料及方法
2.1 bcTANK的全长cDNA的分子克隆
2.1.1 实验材料
2.1.2 主要仪器
2.1.3 试剂
2.1.4 实验方法
2.1.4.1 青鱼脾脏总RNA的提取—Trizol法
2.1.4.2 合成cDNA第一条链
2.1.4.3 bcTANK编码序列
2.2 bcTANK的蛋白表达
2.2.1 实验材料
2.2.2 主要仪器
2.2.3 主要试剂
2.2.4 实验方法
2.2.4.1 bcTANK表达载体的构建
2.2.4.2 质粒中提
2.2.4.3 质粒转染
2.2.4.4 免疫印迹分析
2.3 bcTANK的细胞内定位
2.3.1 实验材料
2.3.2 主要试剂
2.3.3 主要仪器
2.3.4 实验方法
2.3.4.1 bcTANK在 HeLa细胞系中的定位
2.3.4.2 bcTANK在 EPC细胞系中的定位
2.4 bcTANK的功能研究
2.4.1 实验材料
2.4.2 主要试剂
2.4.3 主要仪器
2.4.4 实验方法
2.4.4.1 病毒的生产和滴度测定
2.4.4.2 实时荧光定量RT-PCR
2.4.4.3 双荧光报告实验
2.4.4.4 病毒感染实验
第三章 实验结果
3.1 bcTANK的分子克隆和序列分析
3.2 bcTANK的进化分析
3.3 宿主细胞中bcTANK转录水平分析
3.4 bcTANK蛋白的表达
3.5 bcTANK的细胞内定位
3.6 bcTANK介导的抗病毒信号传导
3.7 bcTANK有助于EPC抵御SVCV和 GCRV病毒
第四章 讨论
参考文献
附录1
附录2
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]鱼类免疫应答机制研究进展[J]. 白姗姗,贾智英,石连玉. 水产学杂志. 2017(04)
[2]鱼类的免疫及存在的问题(上)[J]. 孟思妤,孟长明,陈昌福. 科学养鱼. 2015(11)
[3]RIG-I样受体信号通路及其调控研究进展[J]. 丁云磊,孙英杰,王晓旭,胡跃,费荣梅,丁铲. 中国动物传染病学报. 2014(05)
[4]双荧光素酶报告基因系统的应用研究进展[J]. 耿德玉,原媛,郭华荣. 科技资讯. 2012(21)
[5]鱼类免疫系统的研究进展[J]. 王俊相,李玉萍,孔令富,李莲军. 四川畜牧兽医. 2010(07)
[6]基于Mx启动子和荧光素酶报告基因定量检测鸡Ⅰ型干扰素生物学活性的研究[J]. 陈伟业,葛金英,肇慧君,胡森,温志远,曹文雁,王喜军,黄克和,步志高. 畜牧兽医学报. 2008(01)
[7]基于荧光定量PCR扩增反应的SNP测定法[J]. 单志新,谭虹虹,余细勇,林秋雄. 中国生物化学与分子生物学报. 2005(06)
[8]Ⅰ型干扰素及其在抗病毒和抗细菌感染中的作用[J]. 陈刚,郑大海,杨仉生,程根宏,唐宏. 中国免疫学杂志. 2005(02)
[9]鱼类免疫系统的研究进展[J]. 孙德文,詹勇,许梓荣. 水利渔业. 2002(06)
[10]鱼类体液免疫因子研究进展[J]. 张永安,聂品. 水产学报. 2000(04)
本文编号：3688626
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
1.1 鱼类免疫系统
1.2 RLR信号通路的简介
1.3 TANK的研究概况
1.4 本论文研究目的、内容及意义
第二章 实验材料及方法
2.1 bcTANK的全长cDNA的分子克隆
2.1.1 实验材料
2.1.2 主要仪器
2.1.3 试剂
2.1.4 实验方法
2.1.4.1 青鱼脾脏总RNA的提取—Trizol法
2.1.4.2 合成cDNA第一条链
2.1.4.3 bcTANK编码序列
2.2 bcTANK的蛋白表达
2.2.1 实验材料
2.2.2 主要仪器
2.2.3 主要试剂
2.2.4 实验方法
2.2.4.1 bcTANK表达载体的构建
2.2.4.2 质粒中提
2.2.4.3 质粒转染
2.2.4.4 免疫印迹分析
2.3 bcTANK的细胞内定位
2.3.1 实验材料
2.3.2 主要试剂
2.3.3 主要仪器
2.3.4 实验方法
2.3.4.1 bcTANK在 HeLa细胞系中的定位
2.3.4.2 bcTANK在 EPC细胞系中的定位
2.4 bcTANK的功能研究
2.4.1 实验材料
2.4.2 主要试剂
2.4.3 主要仪器
2.4.4 实验方法
2.4.4.1 病毒的生产和滴度测定
2.4.4.2 实时荧光定量RT-PCR
2.4.4.3 双荧光报告实验
2.4.4.4 病毒感染实验
第三章 实验结果
3.1 bcTANK的分子克隆和序列分析
3.2 bcTANK的进化分析
3.3 宿主细胞中bcTANK转录水平分析
3.4 bcTANK蛋白的表达
3.5 bcTANK的细胞内定位
3.6 bcTANK介导的抗病毒信号传导
3.7 bcTANK有助于EPC抵御SVCV和 GCRV病毒
第四章 讨论
参考文献
附录1
附录2
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]鱼类免疫应答机制研究进展[J]. 白姗姗,贾智英,石连玉. 水产学杂志. 2017(04)
[2]鱼类的免疫及存在的问题(上)[J]. 孟思妤,孟长明,陈昌福. 科学养鱼. 2015(11)
[3]RIG-I样受体信号通路及其调控研究进展[J]. 丁云磊,孙英杰,王晓旭,胡跃,费荣梅,丁铲. 中国动物传染病学报. 2014(05)
[4]双荧光素酶报告基因系统的应用研究进展[J]. 耿德玉,原媛,郭华荣. 科技资讯. 2012(21)
[5]鱼类免疫系统的研究进展[J]. 王俊相,李玉萍,孔令富,李莲军. 四川畜牧兽医. 2010(07)
[6]基于Mx启动子和荧光素酶报告基因定量检测鸡Ⅰ型干扰素生物学活性的研究[J]. 陈伟业,葛金英,肇慧君,胡森,温志远,曹文雁,王喜军,黄克和,步志高. 畜牧兽医学报. 2008(01)
[7]基于荧光定量PCR扩增反应的SNP测定法[J]. 单志新,谭虹虹,余细勇,林秋雄. 中国生物化学与分子生物学报. 2005(06)
[8]Ⅰ型干扰素及其在抗病毒和抗细菌感染中的作用[J]. 陈刚,郑大海,杨仉生,程根宏,唐宏. 中国免疫学杂志. 2005(02)
[9]鱼类免疫系统的研究进展[J]. 孙德文,詹勇,许梓荣. 水利渔业. 2002(06)
[10]鱼类体液免疫因子研究进展[J]. 张永安,聂品. 水产学报. 2000(04)
本文编号：3688626
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3688626.html
