深海微生物低温β-半乳糖苷酶的表达、酶学性质及稳定化研究
发布时间：2022-11-11 23:01
深海是一个黑暗、低温、高压和营养贫瘠的生态环境。深海微生物为了适应这样极端的环境,微生物中分离得到的海洋微生物酶因此具有低温催化高效、耐盐、pH耐受范围广等特殊的酶学性质,因此具有很大的应用潜力。本研究从马里亚纳海沟深海微生物Alteromonas sp.ML117中克隆出产β-半乳糖苷酶的基因Bgal,通过构建表达载体转化至大肠杆菌中进行外源表达。并对其进行纯化和酶学性质的研究,通过单因素和响应面实验筛选并优化了Bgal液体酶液的酶活保护剂最佳配方。通过对Bgal的氨基酸保守序列分析,重组酶Bgal属于糖苷水解酶2家族。SDS-PAGE和凝胶过滤色谱实验结果证明Bgal蛋白为四聚体。通过对表达条件的单因素实验优化,得到了最佳的表达条件是:在37oC、OD600为0.4时,加入0.2 mM IPTG于20oC下继续诱导表达20 h。采用Ni2+亲和层析柱进行分离纯化得到电泳纯的Bgal,纯化倍数为2.1。Bgal可以特异性地水解天然底物乳糖和邻硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷（ONPG）。以ONPG作...
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ONP标准曲线
Bgal同其他β-半乳糖苷酶的序列比对:Pseudoalteromonassp.22b(Ps-sp.-22b),PseudoalteromonashaloplanktisTAE79(Ps-sp.-hal),andE.coli(BGAL-ECOLI).红色箭头表示保守位点残基Fig.2-2MultiplesequencealignmentofBgalwithotherβ-galactosidasesfromPseudoalteromonassp.22b(Ps-sp.-22b),PseudoalteromonashaloplanktisTAE79(Ps-sp.-hal),
pET24a-Bgal质粒酶切图
【参考文献】：
期刊论文
[1]β-半乳糖苷酶的固定化及其在制备低乳糖牛奶中的应用[J]. 李冠龙,刘晓兰,KATROLIA Priti. 食品工业. 2018(09)
[2]β-半乳糖苷酶的研究现状与进展[J]. 董艺凝,陈海琴,张灏,陈卫. 食品与生物技术学报. 2018(04)
[3]生物反馈联合乳果糖治疗老年功能性便秘的疗效[J]. 杨杰,韩晶. 世界最新医学信息文摘. 2017(91)
[4]添加剂提高酶稳定性研究进展[J]. 王亚军,曹块. 发酵科技通讯. 2016(03)
[5]乳糖不耐受的研究进展[J]. 陈健,赛晓勇. 中华流行病学杂志. 2016 (02)
[6]化学修饰提高谷氨酰胺转胺酶活性与热稳定性[J]. 刘松,堵国成,陈坚. 食品与生物技术学报. 2015(11)
[7]采用复合保护剂提高重组普鲁兰酶稳定性[J]. 赵伟超,聂尧,穆晓清,张荣珍,徐岩. 食品与发酵工业. 2015(05)
[8]耐热乳酸菌的筛选及其β-半乳糖苷酶性质分析[J]. 李梦菲,孙庆惠,张彦,杨洪江. 食品工业科技. 2015(18)
[9]多羟基化合物对纤维素酶热稳定性影响的研究[J]. 贾晓龙,王越,曹方,崔战友,安家彦. 可再生能源. 2014(10)
[10]人Eppin蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达[J]. 陈惠玲,刘东,马博,东亚君,何畏,刘威. 免疫学杂志. 2014(02)
硕士论文
[1]耐高温β-半乳糖苷酶突变体的真核表达、高效制备及特性分析[D]. 尹蕾.山东大学 2017
[2]米曲霉β-半乳糖苷酶的基因克隆与酶学特征分析[D]. 贾超.天津科技大学 2016
[3]北极海单胞菌β-半乳糖苷酶的原核表达及其转糖基活性检测[D]. 周莉莉.华东理工大学 2013
[4]耐冷酵母Guehomyces pullulans17-1菌株乳糖酶的研究[D]. 宋春丽.中国海洋大学 2010
[5]Arthrobacter.sp SYBC La1产转糖基β-半乳糖苷酶发酵条件优化及酶学性质研究[D]. 钟义华.江南大学 2008
本文编号：3705910
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ONP标准曲线
Bgal同其他β-半乳糖苷酶的序列比对:Pseudoalteromonassp.22b(Ps-sp.-22b),PseudoalteromonashaloplanktisTAE79(Ps-sp.-hal),andE.coli(BGAL-ECOLI).红色箭头表示保守位点残基Fig.2-2MultiplesequencealignmentofBgalwithotherβ-galactosidasesfromPseudoalteromonassp.22b(Ps-sp.-22b),PseudoalteromonashaloplanktisTAE79(Ps-sp.-hal),
pET24a-Bgal质粒酶切图
【参考文献】：
期刊论文
[1]β-半乳糖苷酶的固定化及其在制备低乳糖牛奶中的应用[J]. 李冠龙,刘晓兰,KATROLIA Priti. 食品工业. 2018(09)
[2]β-半乳糖苷酶的研究现状与进展[J]. 董艺凝,陈海琴,张灏,陈卫. 食品与生物技术学报. 2018(04)
[3]生物反馈联合乳果糖治疗老年功能性便秘的疗效[J]. 杨杰,韩晶. 世界最新医学信息文摘. 2017(91)
[4]添加剂提高酶稳定性研究进展[J]. 王亚军,曹块. 发酵科技通讯. 2016(03)
[5]乳糖不耐受的研究进展[J]. 陈健,赛晓勇. 中华流行病学杂志. 2016 (02)
[6]化学修饰提高谷氨酰胺转胺酶活性与热稳定性[J]. 刘松,堵国成,陈坚. 食品与生物技术学报. 2015(11)
[7]采用复合保护剂提高重组普鲁兰酶稳定性[J]. 赵伟超,聂尧,穆晓清,张荣珍,徐岩. 食品与发酵工业. 2015(05)
[8]耐热乳酸菌的筛选及其β-半乳糖苷酶性质分析[J]. 李梦菲,孙庆惠,张彦,杨洪江. 食品工业科技. 2015(18)
[9]多羟基化合物对纤维素酶热稳定性影响的研究[J]. 贾晓龙,王越,曹方,崔战友,安家彦. 可再生能源. 2014(10)
[10]人Eppin蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达[J]. 陈惠玲,刘东,马博,东亚君,何畏,刘威. 免疫学杂志. 2014(02)
硕士论文
[1]耐高温β-半乳糖苷酶突变体的真核表达、高效制备及特性分析[D]. 尹蕾.山东大学 2017
[2]米曲霉β-半乳糖苷酶的基因克隆与酶学特征分析[D]. 贾超.天津科技大学 2016
[3]北极海单胞菌β-半乳糖苷酶的原核表达及其转糖基活性检测[D]. 周莉莉.华东理工大学 2013
[4]耐冷酵母Guehomyces pullulans17-1菌株乳糖酶的研究[D]. 宋春丽.中国海洋大学 2010
[5]Arthrobacter.sp SYBC La1产转糖基β-半乳糖苷酶发酵条件优化及酶学性质研究[D]. 钟义华.江南大学 2008
本文编号：3705910
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