N-脱氧核糖转移酶Ⅱ突变体高通量筛选方法及迭代饱和定点突变研究

发布时间：2023-01-08 15:37

　　利用瑞士乳杆菌来源的N-脱氧核糖转移酶Ⅱ（Lh. NDT）催化合成2’-脱氧胞苷的反应,建立高通量筛选突变体方法,利用微量滴定板分析快速便捷,显色反应灵敏度高,可以准确区分失活,活性增强与活性减弱的突变体,为成功筛选出高转化率突变体奠定的基础,计划通过迭代饱和定点突变构建NDT的突变体库,获得合成2’-脱氧胞高转化率的NDT突变体。 

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【文章目录】：
1 利用NDT催化合成2'-脱氧胞苷
2 迭代饱和定点突变(Iterative saturation mutagenesis,ISM)
3 NDT活性检测
4 同源建模与关键活性位点的确定
5 饱和定点突变突变体库的构建
6 胞苷脱氨酶联合Berthelot显色反应用于NDT活性检测
    6.1 Berthelot显色反应的线性范围
    6.2 胞苷脱氨酶联合Berthelot显色反应用于NDT活性检测
    6.3 大肠杆菌内源胞苷脱氨酶活性检验
7 高通量全细胞筛选



本文编号：3728730