As-SRF在中国卤虫早期胚胎发育过程中的作用
发布时间：2023-01-15 13:08
中国卤虫是一种生活在高盐环境中的甲壳动物,在不良条件下,卤虫会出现滞育现象。当环境条件有利于原肠胚发育时,卤虫的发育重新开始。血清反应因子（SRF）是一种高度保守的顺式作用因子,是MADS转录因子超家族的成员之一,SRF能与许多基因启动子中的调节元件结合。SRF促进中胚层细胞迁移,在胚胎体轴延长中发挥重要作用,对胚胎发育至关重要。该蛋白质能够调节许多早期基因（例如c-fos）的活性,从而参与调节细胞周期、凋亡、生长和分化。但对于SRF在解除滞育过程中的作用机制尚不清楚。本研究通过RACE技术,克隆得出As-srf的全长c DNA序列,As-srf的序列全长为1223bp,其中包括开放阅读框912bp,149bp的3’-UTR和162bp的5’UTR,共编码303个氨基酸,其蛋白分子量约为34KDa,该蛋白为亲水性蛋白,等电点为6.32;通过免疫荧光实验显示As-SRF在中国卤虫身体各部分均有表达,表明此蛋白没有组织和器官特异性;而后又通过实时荧光定量q PCR和Western Bloting结果证明As-srf和As-SRF的表达水平基本一致,在发育到0-20h内表达量在增加,20h以...
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
1 前言
1.1 中国卤虫
1.1.1 中国卤虫的特征及价值
1.1.2 中国卤虫的滞育现象
1.2 SRF蛋白的研究
1.2.1 SRF的结构特点及功能
1.2.2 SRF上下游相关调控蛋白
1.3 本研究的目的及意义
2.材料与方法
2.1 材料
2.1.1 卤虫的孵化及培养
2.1.2 主要药品及试剂
2.1.3 主要设备仪器
2.2 方法
2.2.1 卤虫总RNA提取
2.2.2 反转cDNA模板
2.2.3 基因片段的扩增
2.2.4 cDNA末端快速扩增(RACE)
2.2.5 PCR产物的回收纯化与克隆
2.2.6 实时荧光定量PCR
2.2.7 As-SRF原核表达
2.2.8 As-SRF大量诱导及纯化
2.2.9 免疫印迹试验
2.2.10 免疫荧光
2.2.11 siRNA干扰
2.3 生物信息学和生物统计分析
3.结果
3.1 As-srf基因全长的克隆
3.1.1 As-srf EST片段的获得
3.1.2 As-srf基因3’端序列的获得
3.1.3 As-srf 5’端序列的获得
3.1.4 As-srf c DNA全长序列
3.2 As-SRF生物信息学分析
3.3 As-SRF分子进化分析
3.4 As-srf表达模式
3.4.1 不同胚胎发育时期As-srf的相对表达量
3.4.2 .不同盐度刺激下As-srf的相对表达量
3.4.3 低温刺激下As-srf的相对表达量
3.5 As-SRF重组蛋白的纯化
3.5.1 As-SRF重组蛋白的诱导表达
3.5.2 检测As-SRF重组蛋白可溶性
3.5.3 As-SRF重组蛋白的纯化
3.6 Western blot
3.6.1 在中国卤虫不同发育时期的表达
3.6.2 在低温刺激下的表达
3.6.3 在高盐刺激下的表达
3.7 As-SRF的免疫荧光分析
3.8 As-srf的 si RNA
4.讨论
4.1 中国卤虫As-srf基因的结构特点
4.2 As-SRF在中国卤虫中的表达部位
4.3 As-srf在中国卤虫早期胚胎发育过程中的表达模式
4.4 As-srf在中国卤虫盐度、温度胁迫应答过程中的表达
4.5 As-srf的功能
4.6 As-SRF的调控过程
结论
参考文献
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]血清反应因子在神经再生中的作用[J]. 童灵犀,黄飞,张传森. 神经损伤与功能重建. 2015(06)
[2]Slug和SRF在食管癌中的表达及临床意义[J]. 何喜,李伟,王志强. 河北医药. 2015(02)
[3]电穿孔法转染293T细胞条件的优化[J]. 刘晓娟,赵晓飞,曾贝妮,张萌,马正海. 生物学通报. 2014(11)
[4]SRF在胃癌细胞中的表达及其意义[J]. 左静,刘亮,赵敏,左连富. 中国肿瘤临床. 2014(03)
[5]血清反应因子参与单侧输尿管结扎大鼠肾小管上皮间充质转分化[J]. 娄未娟,何丽洁,孙文娟,李翠香,殷继鹏,孙世仁,王汉民. 细胞与分子免疫学杂志. 2012(01)
[6]发育不同时期的中国卤虫总RNA提取方法[J]. 伊男,李楠. 安徽农学通报(下半月刊). 2009(02)
[7]卤虫的生殖途径和影响因素[J]. 鲍鹰,逄少军. 海洋科学. 2007(02)
[8]中国卤虫actin基因的实时荧光定量PCR方法的建立和优化[J]. 侯林,姜丽娟,孙文静,张瑞锋,王家庆,赵欣涛,安家璐. 辽宁师范大学学报(自然科学版). 2006(04)
[9]卤虫的生物学研究[J]. 侯林,邹向阳,姚锋. 生物学通报. 2005(07)
[10]Flow cytometric analysis of DNA,telomerase content and multi-gene expression in esophageal epithelial dysplasia[J]. Lian-Fu Zuo Jian-Wen Guo Jiang-Hui Liu, Hebei Provincial Tumor Institute, Shijiazhuang 050011, Hebei Province, China Pei-Zhong Lin, Department of Pathology, Tumor Institute, Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing 100021,China Feng-Ying Qi, Department of Pathology, Hebei Medical University, Shijiazhuang 050017, Hebei Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2003(11)
博士论文
[1]血清反应因子在糖尿病肾病上皮间质转分化中的作用及相关机制[D]. 赵龙.山东大学 2017
硕士论文
[1]SRF介导pol-miR-133a调控牙鲆肌肉发育的分子基础研究[D]. 苏艳芳.上海海洋大学 2015
[2]血清应答因子（SRF）的协同进化研究[D]. 黄晓太.西北农林科技大学 2011
[3]人类基因组中血清反应因子（SRF）潜在顺式作用元件搜索及其特征研究[D]. 李峥刚.西北农林科技大学 2011
[4]去甲基化对结肠癌细胞核内转录因子的影响[D]. 苏婧.中南大学 2010
[5]人胎胰岛细胞培养与凋亡相关因子检测及意义[D]. 王海慧.第三军医大学 2003
本文编号：3731088
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
1 前言
1.1 中国卤虫
1.1.1 中国卤虫的特征及价值
1.1.2 中国卤虫的滞育现象
1.2 SRF蛋白的研究
1.2.1 SRF的结构特点及功能
1.2.2 SRF上下游相关调控蛋白
1.3 本研究的目的及意义
2.材料与方法
2.1 材料
2.1.1 卤虫的孵化及培养
2.1.2 主要药品及试剂
2.1.3 主要设备仪器
2.2 方法
2.2.1 卤虫总RNA提取
2.2.2 反转cDNA模板
2.2.3 基因片段的扩增
2.2.4 cDNA末端快速扩增(RACE)
2.2.5 PCR产物的回收纯化与克隆
2.2.6 实时荧光定量PCR
2.2.7 As-SRF原核表达
2.2.8 As-SRF大量诱导及纯化
2.2.9 免疫印迹试验
2.2.10 免疫荧光
2.2.11 siRNA干扰
2.3 生物信息学和生物统计分析
3.结果
3.1 As-srf基因全长的克隆
3.1.1 As-srf EST片段的获得
3.1.2 As-srf基因3’端序列的获得
3.1.3 As-srf 5’端序列的获得
3.1.4 As-srf c DNA全长序列
3.2 As-SRF生物信息学分析
3.3 As-SRF分子进化分析
3.4 As-srf表达模式
3.4.1 不同胚胎发育时期As-srf的相对表达量
3.4.2 .不同盐度刺激下As-srf的相对表达量
3.4.3 低温刺激下As-srf的相对表达量
3.5 As-SRF重组蛋白的纯化
3.5.1 As-SRF重组蛋白的诱导表达
3.5.2 检测As-SRF重组蛋白可溶性
3.5.3 As-SRF重组蛋白的纯化
3.6 Western blot
3.6.1 在中国卤虫不同发育时期的表达
3.6.2 在低温刺激下的表达
3.6.3 在高盐刺激下的表达
3.7 As-SRF的免疫荧光分析
3.8 As-srf的 si RNA
4.讨论
4.1 中国卤虫As-srf基因的结构特点
4.2 As-SRF在中国卤虫中的表达部位
4.3 As-srf在中国卤虫早期胚胎发育过程中的表达模式
4.4 As-srf在中国卤虫盐度、温度胁迫应答过程中的表达
4.5 As-srf的功能
4.6 As-SRF的调控过程
结论
参考文献
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]血清反应因子在神经再生中的作用[J]. 童灵犀,黄飞,张传森. 神经损伤与功能重建. 2015(06)
[2]Slug和SRF在食管癌中的表达及临床意义[J]. 何喜,李伟,王志强. 河北医药. 2015(02)
[3]电穿孔法转染293T细胞条件的优化[J]. 刘晓娟,赵晓飞,曾贝妮,张萌,马正海. 生物学通报. 2014(11)
[4]SRF在胃癌细胞中的表达及其意义[J]. 左静,刘亮,赵敏,左连富. 中国肿瘤临床. 2014(03)
[5]血清反应因子参与单侧输尿管结扎大鼠肾小管上皮间充质转分化[J]. 娄未娟,何丽洁,孙文娟,李翠香,殷继鹏,孙世仁,王汉民. 细胞与分子免疫学杂志. 2012(01)
[6]发育不同时期的中国卤虫总RNA提取方法[J]. 伊男,李楠. 安徽农学通报(下半月刊). 2009(02)
[7]卤虫的生殖途径和影响因素[J]. 鲍鹰,逄少军. 海洋科学. 2007(02)
[8]中国卤虫actin基因的实时荧光定量PCR方法的建立和优化[J]. 侯林,姜丽娟,孙文静,张瑞锋,王家庆,赵欣涛,安家璐. 辽宁师范大学学报(自然科学版). 2006(04)
[9]卤虫的生物学研究[J]. 侯林,邹向阳,姚锋. 生物学通报. 2005(07)
[10]Flow cytometric analysis of DNA,telomerase content and multi-gene expression in esophageal epithelial dysplasia[J]. Lian-Fu Zuo Jian-Wen Guo Jiang-Hui Liu, Hebei Provincial Tumor Institute, Shijiazhuang 050011, Hebei Province, China Pei-Zhong Lin, Department of Pathology, Tumor Institute, Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing 100021,China Feng-Ying Qi, Department of Pathology, Hebei Medical University, Shijiazhuang 050017, Hebei Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2003(11)
博士论文
[1]血清反应因子在糖尿病肾病上皮间质转分化中的作用及相关机制[D]. 赵龙.山东大学 2017
硕士论文
[1]SRF介导pol-miR-133a调控牙鲆肌肉发育的分子基础研究[D]. 苏艳芳.上海海洋大学 2015
[2]血清应答因子（SRF）的协同进化研究[D]. 黄晓太.西北农林科技大学 2011
[3]人类基因组中血清反应因子（SRF）潜在顺式作用元件搜索及其特征研究[D]. 李峥刚.西北农林科技大学 2011
[4]去甲基化对结肠癌细胞核内转录因子的影响[D]. 苏婧.中南大学 2010
[5]人胎胰岛细胞培养与凋亡相关因子检测及意义[D]. 王海慧.第三军医大学 2003
本文编号：3731088
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3731088.html
