多酶融合表达体系以木聚糖为辅助底物高效合成(S)-苯乙二醇

发布时间：2023-02-08 21:37

　　【目的】利用木聚糖为辅助底物加强手性催化反应中的辅酶循环,构建来源于近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis) CCTCC M203011的(S)-羰基还原酶Ⅱ(SCRⅡ)、枯草芽孢杆菌(Bacillus sp.) YX-1葡萄糖脱氢酶突变体Ala258Phe/GDH和里氏木霉(Trichoderma reesei)RutC-30木聚糖酶(XYN2)在大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3)中的融合表达体系,高效合成(S)-苯乙二醇。【方法】调节3种酶编码基因在pET-28a载体上的位置,运用重叠延伸PCR技术,构建了E.coli/pET-SCRⅡ-A258F-XYN2和E. coli/pET-A258F-SCRⅡ-XYN2两种重组菌,研究了其合成(S)-苯乙二醇的最适反应条件。【结果】重组菌株E.coli/pET-SCRⅡ-A258F-XYN2在底物2-羟基苯乙酮与辅助底物木聚糖的比例为1:1、35℃、pH为7.0条件下,(S)-苯乙二醇的产率达98.8%(W/W);而重组菌株E. coli/pET-A258F-SCRⅡ-XYN2在底物与辅助底...

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株与质粒：
        1.1.2 主要试剂和仪器：
    1.2 融合表达质粒和重组菌株构建
    1.3 菌体的表达与纯化
    1.4 酶活力的测定
    1.5 不对称还原反应及其检测
    1.6 温度和p H对多酶融合表达催化转化(S)-苯乙二醇的影响
    1.7 底物与辅助底物之间配比对转化(S)-苯乙二醇的影响
2 结果和分析
    2.1 重组菌株的构建
    2.2 重组菌株的表达与纯化
    2.3 重组菌株的酶活测定
    2.4 融合表达体系催化转化(S)-苯乙二醇的最适温度和p H
    2.5 底物与辅助底物配比对催化转化(S)-苯乙二醇的影响
    2.6 融合表达体系转化(S)-苯乙二醇时间
3 讨论



本文编号：3738415