CRISPR/Cas9介导的拟南芥TT1基因的敲除

发布时间：2023-03-20 03:41

　　在菜油品质上黄籽相较于褐籽更为优良,且更易于合成高质量的生物柴油。已有研究表明TT1(TRANSPARENT TESTA1)基因是类黄酮代谢途径中的关键基因,为了通过CRISPR/Cas9基因编辑载体验证TT1基因在白菜型油菜中的功能,本研究先在拟南芥中进行了TT1基因的编辑。构建了CRISPR/Cas9 TT1基因编辑载体,通过农杆菌介导侵染拟南芥花序的遗传转化方式将编辑载体引入拟南芥Columbia生态型,通过表型观察发现T1代12株阳性苗中产生了11株表型株,其中1株表现为褐籽,2株表现为黄籽,9株表现为黄籽和褐籽的嵌合。测序检测分析其突变型结果发现,TT1靶位点处有单碱基缺失、单碱基插入、多个碱基缺失、碱基缺失后插入以及两个靶位点之间多个碱基缺失的多种突变类型。T2代获得一株纯合突变体,TT1两个靶位点之间产生79 bp的碱基缺失,且全株表现为黄籽。本研究为CRISPR/Cas9载体在白菜型油菜中TT1基因功能验证提供借鉴,并为其它作物TT1同源基因的功能验证提供了新的突变体材料。

【文章页数】：10 页

【文章目录】：
1 结果与分析
    1.1 靶向TT1基因的CRISPR/Cas9载体的构建
    1.2 阳性苗的检测
    1.3 突变体表型鉴定
    1.4 T1代阳性株的突变检测分析
    1.5 纯合突变体的获得
2 讨论
3 材料与方法
    3.1 材料
    3.2 CRISPR/Cas9目标位点的选择及载体构建
    3.3 农杆菌介导的遗传转化
    3.4 拟南芥tt1突变体的检测及表型观察
    3.5 拟南芥纯合突变体的获得
作者贡献



本文编号：3766610