发展化学探针标记技术研究β-arrestin1及GPCR的作用机制

发布时间：2023-04-19 01:43

　　G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors,GPCRs)是目前已知人类基因组内最大的受体家族,广泛分布于各个组织器官中,并参与调控机体几乎所有的生命活动。GPCRs主要通过G蛋白和arrestins介导细胞内信号转导。其中β-arrestins在受体的脱敏-内化-复敏-再循环过程及G蛋白非依赖的信号转导中起到重要的调控作用。论文第一部分利用核磁探针TMSiPhe研究β-arrestin1的构象变化。在实验室早期研究中,杨帆等人利用基因密码子扩展技术将二氟代酪氨酸插入β-arrestin1上7个磷酸基团结合区域(命名为Site 1～7),通过19F NMR实验发现GPCR C-tail上不同的磷酸化编码形式会引起β-arrestin1磷酸根结合口袋的差异化响应,调控β-arrestin1发生特异性构象变化,进而影响β-arrestin1与下游蛋白的相互作用。然而,β-arrestin1上具体某一个磷酸根结合位点是如何影响β-arrestin1的激活态构型,调控β-arrestin 1下游信号转导?基于Arun K.Shukla等人2013年发表在Nature上...

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
符号说明
第一章 背景介绍
    1.1 G蛋白偶联受体(GPCRs)
        1.1.1 G蛋白偶联受体简介
        1.1.2 G蛋白偶联受体的结构及分类
        1.1.3 经典G蛋白依赖的信号转导通路
        1.1.4 G蛋白偶联受体的脱敏与内吞
    1.2 arrestin
        1.2.1 arrestin简介
        1.2.2 arrestin的结构
        1.2.3 arrestin的功能
        1.2.4 GPCRs磷酸化C Tail与β-arrestin1的不同结合模式
    1.3 X射线晶体衍射
    1.4 核磁共振(MMR)
    1.5 生物发光共振能量转移(BRET)
    1.6 电化学生物传感器
    1.7 本课题研究内容及意义
第二章 V2R T347磷酸化调控β-arrestin1的构象变化及信号转导
    2.1 实验设计
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验仪器
        2.2.2 化学试剂
        2.2.3 生化试剂
        2.2.4 耗材和试剂盒
        2.2.5 生物材料
        2.2.6 实验试剂配制
    2.3 实验方法
        2.3.1 引物合成与DNA测序
        2.3.2 质粒构建
        2.3.3 质粒转化
        2.3.4 蛋白表达与纯化
        2.3.5 蛋白鉴定
        2.3.6 X射线晶体衍射
        2.3.7 NMR实验
        2.3.8 BRET实验
    2.4 实验结果
        2.4.1 β-arrestinl-V2Rpp-1-Fab30复合物X射线晶体衍射
        2.4.2 NMR实验
        2.4.3 B RET实验
    2.5 结果讨论
第三章 A2AR腺苷受体电化学传感器
    3.1 实验设计
    3.2 实验材料
        3.2.1 实验仪器
        3.2.2 化学试剂
        3.2.3 生化试剂
        3.2.4 耗材和试剂盒
        3.2.5 生物材料
        3.2.6 实验试剂配制
    3.3 实验方法
        3.3.1 引物合成与DNA测序
        3.3.2 质粒构建
        3.3.3 A2A蛋白的表达与纯化
        3.3.4 β-arrestin1蛋白表达
        3.3.5 蛋白鉴定
        3.3.6 探针偶联预实验
    3.4 实验结果
        3.4.1 质粒构建
        3.4.2 A2A蛋白表达与纯化
        3.4.3 探针标记预实验
    3.5 结果讨论
第四章 总结与展望
参考文献
致谢



本文编号：3793462