T7噬菌体穿孔素的克隆表达及对宿主损伤研究

发布时间：2023-04-18 23:58

　　为研究T7噬菌体穿孔素(Holin)蛋白对宿主细菌的增殖性能的影响,根据T7噬菌体gene 17.5设计引物,PCR扩增Holin基因和序列分析,将该基因插入原核表达载体构建重组表达菌BL-Holin。IPTG诱导Holin蛋白表达,SDS-PAGE和Western-blot检测目标蛋白。分光光度法测定Holin蛋白对宿主细菌增殖性能的影响,扫描电镜观察重组菌诱导后表面结构的损伤情况。结果表明,成功扩增Holin基因,构建的重组菌能高效表达Holin蛋白。T7噬菌体Holin蛋白含有1个跨膜区,氨基端位于胞外、羧基端位于胞内。Holin蛋白的表达量随诱导时间延长而逐渐增加,细菌浓度从诱导0 h至2 h逐渐升高,2 h后细菌浓度开始下降,直至6 h,电镜观察发现诱导细菌表面塌陷、皱缩进而死亡。研究结果显示,Holin蛋白具有抑菌活性,这为进一步开发噬菌体抗菌制剂提供应用基础和技术支持。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验材料
    1.2 Holin基因分析
    1.3 重组菌构建
    1.4 Holin蛋白诱导表达与鉴定
    1.5 Holin蛋白表达对宿主菌增殖的影响
    1.6 Holin蛋白表达对宿主菌表面结构的影响
2 结果
    2.1 Holin蛋白序列分析
    2.2 Holin基因的克隆及重组质粒构建
    2.3 Holin蛋白诱导表达及鉴定
    2.4 Holin蛋白的表达对宿主细菌增殖的影响
    2.5 Holin蛋白对宿主细菌表面结构的损伤
3 讨论



本文编号：3793300