寡孢节丛孢钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶（CaMKs）功能的研究
发布时间：2023-06-02 03:06
寡孢节丛孢(Arthrobobrys oligospora)是一种典型的捕食线虫真菌,通过产生特殊的捕食器官-三维菌网(three-dimensional networks)来捕捉和侵染线虫,寡孢节丛孢是研究真菌与线虫相互作用的代表性菌株。钙离子/钙调素依赖的蛋白激酶(Ca2+/calmodulin-dependent kinases,CaMKs)是一类重要的多功能信号蛋白,位于G蛋白信号的下游,在激素或次级信使的调控下,参与胞内信号传导,调节多种不同的生物学过程。本论文选取寡孢节丛孢为试验菌株,以5种CaMKs(CaMK A,AOL s00078g95;CaMK B,AOL s00083g485;CaMKK Cl,AOLs00215g625;CaMKKC2,AOLs00110g86;CaMKD,AOLs00080g218)为研究对象,通过基因敲除、表型特征比较、环境胁迫耐受试验和荧光定量PCR等技术,初步探究了 5种CaMKs在寡孢节丛孢生长发育、环境胁迫耐受、产抱和致病过程中的功能。主要实验结果:1.CaMKs的功能...
【文章页数】：104 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 食线虫真菌及CaMK蛋白研究进展
1 植物病原线虫的危害及生防因子的研究概况
2 食线虫真菌的研究概况
3 CaMK蛋白的功能研究进展
4 本论文的选题依据及研究意义
第二章 CaMKs蛋白的序列特征和聚类分析
1 前言
2 材料与方法
2.1 CaMK蛋白序列来源
2.2 CaMK蛋白功能结构域分析
2.3 CaMK蛋白系统发育分析及其命名
3 结果
3.1 CaMK蛋白的部分理化性质和功能结构域分析
3.2 CaMK蛋白的系统进化分析
4 讨论
第三章 CaMK蛋白编码基因的敲除和转化子验证
1. 前言
2 实验材料及仪器
2.1 试验菌株和质粒
2.2 主要溶液及培养基
2.3 实验药品及试剂盒
2.4 主要仪器及设备
3 实验方法
3.1 敲除载体构建方法
3.2 敲除引物设计
3.2.1 29 bp同源臂序列及扩增潮霉素抗性基因的引物
3.2.2 扩增5个CaMK基因的引物
3.3 寡孢节丛孢基因组提取
3.4 质粒pSCN44和pRS426的提取
3.5 pRS426质粒双酶切及片段纯化回收
3.6 目的片段的扩增和纯化回收
3.7 FY834菌株感受态制备及电转
3.8 酵母转化子质粒提取
3.9 酵母转化子验证
3.10 敲除载体全长片段扩增及纯化回收
3.11 寡孢节丛孢原生质体的制备及转化
3.12 转化子基因组提取
3.13 阳性转化子PCR验证
3.14 阳性转化子的Southern blot验证
4 实验结果
4.1 寡孢节丛孢5个CaMK蛋白编码基因上下游同源片段及hph基因片段扩增
4.2 pRS426质粒双酶切
4.3 酵母转化子
4.4 酵母转化子质粒PCR验证
4.5 阳性转化子PCR验证
4.6 阳性转化子Southern blot验证
5 讨论
5.1 敲除载体的构建
5.2 原生质体的制备及转化
5.3 敲除转化子PCR验证
5.4 敲除转化子Southern blot验证
6 小结
第四章 寡孢节丛孢野生株与△CaMKs突变株的生长速率和产孢分析
1 前言
2. 实验材料及仪器
2.1 实验菌株
2.2 主要培养基
2.3 主要药品
2.4 主要仪器及设备
3. 实验方法
3.1 生长速率比较
3.2 产孢的比较
3.3 野生型菌株和突变菌株样品总RNA的提取
3.4 反转录获得cDNA
3.5 相关基因的选取及引物设计
3.6 Real-Time PCR
4 实验结果
4.1 CaMK蛋白在寡孢节丛孢中表达量分析
4.2 CaMK基因突变菌株生长速率及菌落形态比较
4.3 CaMK蛋白突变菌株的产孢能力比较
4.4 产孢相关基因定量结果
5 讨论
5.1 生长速率和菌落形态比较
5.2 CaMK蛋白在菌丝生长不同时间点转录水平比较
5.3 产孢比较
5.4 产孢相关基因定量结果
6 小结
第五章 寡孢节丛孢野生株与△CaMKs突变株的环境胁迫耐受性分析
1 前言
2 实验材料及仪器
2.1 实验菌株
2.2 主要培养基
2.3 主要药品
2.4 主要仪器及设备
3 实验方法
3.1 抗高渗比较
3.2 抗氧化比较
3.3 抗细胞壁合成比较
3.4 热应激比较
3.5 抗紫外辐射比较
4 实验结果
4.1 CaMK蛋白突变菌株的抗高渗比较
4.2 CaMK蛋白突变菌株的抗氧化比较
4.3 CaMK蛋白突变菌株的抗细胞壁合成干扰剂的能力比较
4.4 CaMK蛋白突变菌株的热应激敏感性比较
4.5 CaMK蛋白突变菌株高温胁迫下孢子萌发率比较
4.6 CaMK蛋白突变菌株高温胁迫恢复能力比较
4.7 CaMK蛋白敲除突变菌株高温胁迫下产孢量比较
4.8 CaMK蛋白突变菌株抗紫外辐射比较
5 讨论
5.1 抗逆性比较
5.2 抗氧化比较
5.3 抗细胞壁合成比较
5.4 热应激比较
5.5 抗紫外辐射比较
6 小结
第六章 寡孢节丛孢野生型菌株与△CaMKs突变菌株的捕器形成和致病性分析
1 前言
2 实验材料及仪器
2.1 实验菌株
2.2 主要培养基
2.3 主要药品
2.4 主要仪器及设备
3 实验方法
3.1 捕器数量及形态比较
3.2 杀线虫率比较
4 实验结果
4.1 CaMK蛋白突变菌株的捕器形态比较
4.2 CaMK蛋白突变菌株的捕器数量比较
4.3 CaMK蛋白突变菌株的杀线虫率比较
5 讨论
6 小结
全文小结及存在的问题
参考文献
附录
附录Ⅰ 论文中使用的缩写及中英文对照
附录Ⅱ 论文中使用的质粒图谱
附录Ⅲ 论文RT-PCR序列
附录Ⅳ 硕士阶段发表的文章
附录Ⅴ 硕士阶段获得的奖励和荣誉
致谢
本文编号：3827541
【文章页数】：104 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 食线虫真菌及CaMK蛋白研究进展
1 植物病原线虫的危害及生防因子的研究概况
2 食线虫真菌的研究概况
3 CaMK蛋白的功能研究进展
4 本论文的选题依据及研究意义
第二章 CaMKs蛋白的序列特征和聚类分析
1 前言
2 材料与方法
2.1 CaMK蛋白序列来源
2.2 CaMK蛋白功能结构域分析
2.3 CaMK蛋白系统发育分析及其命名
3 结果
3.1 CaMK蛋白的部分理化性质和功能结构域分析
3.2 CaMK蛋白的系统进化分析
4 讨论
第三章 CaMK蛋白编码基因的敲除和转化子验证
1. 前言
2 实验材料及仪器
2.1 试验菌株和质粒
2.2 主要溶液及培养基
2.3 实验药品及试剂盒
2.4 主要仪器及设备
3 实验方法
3.1 敲除载体构建方法
3.2 敲除引物设计
3.2.1 29 bp同源臂序列及扩增潮霉素抗性基因的引物
3.2.2 扩增5个CaMK基因的引物
3.3 寡孢节丛孢基因组提取
3.4 质粒pSCN44和pRS426的提取
3.5 pRS426质粒双酶切及片段纯化回收
3.6 目的片段的扩增和纯化回收
3.7 FY834菌株感受态制备及电转
3.8 酵母转化子质粒提取
3.9 酵母转化子验证
3.10 敲除载体全长片段扩增及纯化回收
3.11 寡孢节丛孢原生质体的制备及转化
3.12 转化子基因组提取
3.13 阳性转化子PCR验证
3.14 阳性转化子的Southern blot验证
4 实验结果
4.1 寡孢节丛孢5个CaMK蛋白编码基因上下游同源片段及hph基因片段扩增
4.2 pRS426质粒双酶切
4.3 酵母转化子
4.4 酵母转化子质粒PCR验证
4.5 阳性转化子PCR验证
4.6 阳性转化子Southern blot验证
5 讨论
5.1 敲除载体的构建
5.2 原生质体的制备及转化
5.3 敲除转化子PCR验证
5.4 敲除转化子Southern blot验证
6 小结
第四章 寡孢节丛孢野生株与△CaMKs突变株的生长速率和产孢分析
1 前言
2. 实验材料及仪器
2.1 实验菌株
2.2 主要培养基
2.3 主要药品
2.4 主要仪器及设备
3. 实验方法
3.1 生长速率比较
3.2 产孢的比较
3.3 野生型菌株和突变菌株样品总RNA的提取
3.4 反转录获得cDNA
3.5 相关基因的选取及引物设计
3.6 Real-Time PCR
4 实验结果
4.1 CaMK蛋白在寡孢节丛孢中表达量分析
4.2 CaMK基因突变菌株生长速率及菌落形态比较
4.3 CaMK蛋白突变菌株的产孢能力比较
4.4 产孢相关基因定量结果
5 讨论
5.1 生长速率和菌落形态比较
5.2 CaMK蛋白在菌丝生长不同时间点转录水平比较
5.3 产孢比较
5.4 产孢相关基因定量结果
6 小结
第五章 寡孢节丛孢野生株与△CaMKs突变株的环境胁迫耐受性分析
1 前言
2 实验材料及仪器
2.1 实验菌株
2.2 主要培养基
2.3 主要药品
2.4 主要仪器及设备
3 实验方法
3.1 抗高渗比较
3.2 抗氧化比较
3.3 抗细胞壁合成比较
3.4 热应激比较
3.5 抗紫外辐射比较
4 实验结果
4.1 CaMK蛋白突变菌株的抗高渗比较
4.2 CaMK蛋白突变菌株的抗氧化比较
4.3 CaMK蛋白突变菌株的抗细胞壁合成干扰剂的能力比较
4.4 CaMK蛋白突变菌株的热应激敏感性比较
4.5 CaMK蛋白突变菌株高温胁迫下孢子萌发率比较
4.6 CaMK蛋白突变菌株高温胁迫恢复能力比较
4.7 CaMK蛋白敲除突变菌株高温胁迫下产孢量比较
4.8 CaMK蛋白突变菌株抗紫外辐射比较
5 讨论
5.1 抗逆性比较
5.2 抗氧化比较
5.3 抗细胞壁合成比较
5.4 热应激比较
5.5 抗紫外辐射比较
6 小结
第六章 寡孢节丛孢野生型菌株与△CaMKs突变菌株的捕器形成和致病性分析
1 前言
2 实验材料及仪器
2.1 实验菌株
2.2 主要培养基
2.3 主要药品
2.4 主要仪器及设备
3 实验方法
3.1 捕器数量及形态比较
3.2 杀线虫率比较
4 实验结果
4.1 CaMK蛋白突变菌株的捕器形态比较
4.2 CaMK蛋白突变菌株的捕器数量比较
4.3 CaMK蛋白突变菌株的杀线虫率比较
5 讨论
6 小结
全文小结及存在的问题
参考文献
附录
附录Ⅰ 论文中使用的缩写及中英文对照
附录Ⅱ 论文中使用的质粒图谱
附录Ⅲ 论文RT-PCR序列
附录Ⅳ 硕士阶段发表的文章
附录Ⅴ 硕士阶段获得的奖励和荣誉
致谢
本文编号：3827541
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