一株降解纤维素放线菌的产纤维素酶基因克隆与表达

发布时间：2023-09-24 17:21

　　【背景】纤维素在自然界中储量丰富,但天然纤维素的难降解性成为广泛应用纤维素资源的壁垒,近年来利用微生物来降解纤维素成为热点研究。【目的】筛选分离得到一株具有降解纤维素功能的放线菌菌株Lb1,通过全基因组测序确定其产纤维素酶关键基因5676,对基因5676进行克隆转化,使其在大肠杆菌中进行表达。【方法】通过基因工程技术将产纤维素基因连接到表达质粒上并导入表达菌株,对其降解纤维素生成葡萄糖的能力进行探究。【结果】将Lb1菌株的16S rRNA基因进行比对,确定菌株Lb1属于链霉菌属,命名为Streptomyces sp. Lb1。成功构建出纤维素酶表达载体,并且导入表达菌株大肠杆菌BL21(DE3),重组菌株的产纤维素酶能力大于空载菌株。【结论】通过基因工程技术成功克隆出产纤维素酶基因,从而表达纤维素酶,为今后利用微生物降解纤维素的大规模应用提供参考。

【文章页数】：10 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 培养基
        1.1.2 主要试剂和仪器
    1.2 方法
        1.2.1 菌株的筛选
        1.2.2 菌株的鉴定
        1.2.3 菌株Lb1的全基因组学分析
        1.2.4 纤维素酶分泌表达载体的构建
        1.2.5 纤维素酶重组表达菌株的构建
        1.2.6 葡萄糖标准曲线
        1.2.7 纤维素酶活力的测定
2 结果与分析
    2.1 菌株的筛选
    2.2 菌株的鉴定
    2.3 Lb1的全基因组学分析
        2.3.1 Lb1的基因组特征
        2.3.2 Lb1的GO功能注释
        2.3.3 菌株Lb1的碳水化合物活性酶注释
        2.3.4 菌株Lb1的KEGG代谢通路分析
    2.4 纤维素酶表达载体的构建
    2.5 纤维素酶表达菌株的构建
    2.6 表达菌株纤维素酶活性的测定
3 讨论
4 结论



本文编号：3848434