黑曲霉中生物合成赭曲霉毒素A的非核糖体肽合成酶基因的鉴定

发布时间：2023-12-04 19:48

　　赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)是国际癌症研究机构认定的"2B"类致癌物。黑曲霉Aspergillus niger是美国食品药品监督局认可的食品安全菌。然而近年来陆续发现某些黑曲霉菌株能够产生OTA,这会对人类健康构成潜在威胁。阐明黑曲霉生物合成OTA的关键基因有助于理解OTA生物合成机制,这对OTA污染的防控具有重要意义。本研究克隆了产OTA黑曲霉中非核糖体肽合成酶(NRPS)编码基因(An15g07910),并对其进行了生物信息学分析,在此基础上采用同源重组的方法敲除了该基因,获得了一株性能稳定的敲除突变株Δnrps。与野生株相比,Δnrps突变株的表型在CYA培养基中并无明显改变,但在7d培养期间完全失去了合成赭曲霉毒素α(ochratoxinα,OTα)和OTA的能力,而赭曲霉毒素β(ochratoxinβ,OTβ)的合成不受影响。在野生株培养过程中,该nrps基因前4d表达量逐渐增大,并在第4天达到最高,随后基因表达量逐渐下降并趋于稳定,这与OTA的含量变化基本一致。结果表明该nrps基因(An15g07910)参与OTA的生物合成,其编码的NRPS可能负责催...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株和质粒：
        1.1.2 引物：
        1.1.3 试剂：
        1.1.4 培养基：
    1.2 nrps基因的克隆与序列分析
    1.3 Δnrps敲除菌株的构建
    1.4 野生株与Δnrps突变株菌落直径、菌落形态与分生孢子差异
    1.5 野生株与Δnrps突变株中OTA及其衍生物的检测
    1.6 OTA动力学分析、OTA基因簇内基因表达量的变化
2 结果与分析
    2.1 nrps基因的克隆与序列分析
    2.2 敲除菌株Δnrps的构建
    2.3 野生株与Δnrps突变株的菌落形态、菌落直径与分子孢子形态差异
    2.4 OTA及其衍生物的产量检测
    2.5 基因的相对表达量与OTA动力学分析
3 讨论



本文编号：3870596