家蚕碱性核酸酶BmdsRNase的原核表达和对dsRNA的降解效果

发布时间：2023-12-29 18:26

　　dsRNase是一种DNA/RNA非特异性碱性核酸酶,这类酶具有广泛的底物特异性,可影响鳞翅目昆虫的RNA干扰效率。为验证从家蚕消化液分离的BmdsRNase能否在家蚕体外表达并降解dsRNA,根据其功能域构建了3个不同基因片段的表达载体,转化大肠埃希菌进行原核表达,体外诱导培养后进行dsRNA的降解试验。SDS-PAGE显示BmdsRNase的3个基因片段均能在原核系统中表达,最适宜的蛋白质诱导时间为2 h,表达产物主要以包涵体形式存在。实时定量PCR结果表明,3种重组表达菌的表达产物均可降解dsRNA。上述结果为后续研究BmdsRNase的功能,以及鳞翅目昆虫的RNA干扰机制提供了实验数据。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 家蚕的饲养与解剖
    1.2 总RNA的提取和c DNA合成
    1.3 引物设计
    1.4 BmdsRNase的基因片段克隆
    1.5 表达载体的构建
    1.6 BmdsRNase蛋白的原核诱导表达
    1.7 ds GFP的合成
    1.8 基于dsRNA降解反应的BmdsRNase酶活性测定
2 结果与分析
    2.1 BmdsRNase不同基因片段的克隆和鉴定
    2.2 BmdsRNase原核表达载体的构建
    2.3 BmdsRNase蛋白诱导表达条件的优化
    2.4 BmdsRNase蛋白表达形式的鉴定
    2.5 BmdsRNase蛋白降解dsRNA能力的检测
3 讨论



本文编号：3876214