外泌体在小反刍兽疫病毒传播过程中的作用及其机制研究

发布时间：2024-01-24 14:20

　　小反刍兽疫(Peste des petits ruminants,PPR)是由小反刍兽疫病毒(Peste des Petits Ruminants virus,PPRV)引起的一种急性、烈性和高度接触性传染病。PPR主要侵害绵羊、山羊等小反刍动物,以口炎、肺炎和发热为主要特征,该病严重阻碍了羊养殖业的发展。外泌体(exosomes)是一类介导细胞间通讯的纳米级囊泡,可通过其载荷的蛋白质、核酸、脂类等物质调节摄取这些外泌体的细胞的生物学活性。近年研究表明,外泌体介导的病毒逃逸或宿主免疫系统抑制可能是病毒传播以及致病的一条关键途径。我们的前期研究证明,PPRV感染引起山羊外周血单个核细胞(PBMCs)外泌体释放水平上升,提示外泌体在PPRV在细胞间传播中发挥作用。本研究旨在揭示PPRV感染诱导的外泌体在病毒传播中的作用及其机制,研究内容及结果如下:1. 将PPRV疫苗弱毒(N75/1株)感染非洲绿猴肾细胞(Vero)及山羊PBMCs后收集上清,通过低速离心除去死细胞、细胞成分和细胞碎片后,结合过滤技术除去游离的病毒粒子,超高速离心沉淀外泌体,最后用外泌体提取试剂盒富集纯化外泌体。通过纳米粒...

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
主要符号对照表
文献综述
    第一章 小反刍兽疫病毒和外泌体研究进展
        1.1 小反刍兽疫病毒(PPRV)研究进展
            1.1.1 PPRV的病原学特征
            1.1.2 PPRV的防治现状
            1.1.3 PPRV的致病机制
        1.2 外泌体的生物学特性以及其在病毒传播中的作用
            1.2.1 外泌体形成过程
            1.2.2 外泌体的组分及各组分的生物学功能
            1.2.3 外泌体的分离及鉴定
            1.2.4 外泌体在病毒传播中的作用
        1.3 细胞自噬在外泌体分泌中的作用
        1.4 本研究的目的意义
试验研究
    第二章 外泌体在PPRV传播过程中的作用
        2.1 材料
            2.1.1 细胞和毒株
            2.1.2 主要仪器
            2.1.3 主要试剂
        2.2 方法
            2.2.1 细胞的分离与培养
            2.2.2 病毒增殖、毒力测定及病毒接种
            2.2.3 外泌体的提取、纯化及纯度鉴定
            2.2.4 流式细胞术检测PPRV接种细胞后外泌体分泌情况
            2.2.5 激光共聚焦分析外泌体是否包裹PPRV成分
            2.2.6 普通PCR检测外泌体中PPRV核酸水平
            2.2.7 荧光定量PCR定量细胞内外病毒RNA
            2.2.8 Western Blot分析外泌体中是否包裹病毒N蛋白
            2.2.9 GW4869处理细胞抑制外泌体分泌
            2.2.10 数据分析
        2.3 结果
            2.3.1 PPRV感染诱导细胞外泌体分泌水平升高
            2.3.2 外泌体的纯度鉴定
            2.3.3 PPRV感染源外泌体在PPRV传播中的作用
            2.3.4 外泌体抑制剂处理对PPRV外泌体传播途径的影响
        2.4 讨论
        2.5 小结
    第三章 外泌体介导PPRV传播的作用机制
        3.1 材料
            3.1.1 主要仪器
            3.1.2 主要试剂
        3.2 方法
            3.2.1 雷帕霉素诱导的细胞自噬对外泌体分泌的影响
            3.2.2 干扰自噬关键基因抑制自噬对外泌体分泌的影响
            3.2.3 过表达或者干扰TSG101对外泌体分泌和病毒释放的影响
            3.2.4 不同病毒蛋白与TSG101的相互作用
            3.2.5 统计分析
        3.3 结果
            3.3.1 雷帕霉素诱导细胞自噬增加外泌体分泌水平
            3.3.2 干扰细胞自噬抑制外泌体分泌水平
            3.3.3 TSG101 调控外泌体介导的PPRV的释放
            3.3.4 PPRV-N、PPRV-H和 PPRV-C与 TSG101 的互作关系
        3.4 讨论
        3.5 小结
    第四章 结论
参考文献
附录
致谢
个人简历



本文编号：3883964