骨髓间充质干细胞向造血细胞分化的体外诱导体系构建及优化

发布时间：2024-05-19 04:41

　　目的构建模拟胚胎期不同造血部位的造血微环境体系用于体外诱导骨髓间充质干细胞(BMSC)向造血细胞分化,并初步评价分化效率。方法采用体视显微镜及HE染色观察E11.5小鼠胚胎卵黄囊(YS)、胎盘(PL)和胎肝(FL)的解剖部位和形态;选取E7.5～E9.5、 E10.5～E12.5及E13.5～E15.5胚胎YS、 PL和FL组织进行基质细胞培养并制备条件培养液,即为卵黄囊基质细胞条件培养液(YSSC-CM)、胎盘基质细胞条件培养液(PLSC-CM)和胎肝基质细胞条件培养液(FLSC-CM),与体外扩增的SD大鼠BMSC共培养。实验分为对照组、白细胞介素6(IL-6)联合干细胞因子(SCF)处理组、 YSSC-CM处理组、 PLSC-CM处理组和FLSC-CM处理组。共培养7～9 d,收集培养液中漂浮细胞。吉姆萨染色检测细胞形态,直接免疫荧光术检测细胞表面特异性分子CD34和CD45的表达,集落形成实验检测粒-巨噬细胞集落形成单位(GM-CFU)鉴定分化细胞。结果体视显微镜下观察鼠胚PL和FL与人胚的位置相同,而YS是包裹在胚体及羊膜的外侧, HE染色显示PL血管迷路、 FL血窦和YS血...

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【部分图文】：

图1SD大鼠BMSC的培养和鉴定

采用全骨髓法结合差速贴壁法从SD大鼠骨髓分离BMSC。传代纯化后细胞形态趋于一致,以长梭形与纺锤形为主,细胞集落排列成鱼群状或旋涡状。细胞体积较大,有1～2个圆形或椭圆形核,核仁清晰(图1A)。成骨诱导可见典型的钙结节(图1B)。成脂诱导可见细胞间和细胞内存在红色脂滴(图....

图2体视显微镜观察E11.5的BALB/c小鼠胚胎不同造血部位

体视显微镜下,无菌取材,胚胎、胎体、卵黄囊、胎肝、胎盘(图2),单个胚胎呈梨形。剥离胎膜后,可见YS为一层富含血管的透明膜囊,包裹羊膜与胎体,附着于PL中心。PL为一圆盘状结构,镜下观察PL胎儿面中央呈鲜红色,周边颜色较浅。FL位于心脏下方,呈鲜红色,....

图3HE染色检测E11.5的BALB/c小鼠胚胎不同造血部位形态特征

图2体视显微镜观察E11.5的BALB/c小鼠胚胎不同造血部位2.3YSSC-CM、PLSC-CM和FLSC-CM的采集

图4原代培养第5天细胞图像(相差显微镜,×100)

消化后的卵黄囊、胎盘和胎肝细胞培养48h后,均可见有数量不等的贴壁细胞,呈多角形或梭形,每3～4d换液1次,5～7d细胞汇合可达80%左右(图4),此时换用无血清高糖DMEM培养液,培养箱培养24～48h后,收集上清,用0.22μm的微孔滤膜过滤除菌及....

本文编号：3977612