利用荧光蛋白示踪脑微血管内皮细胞微丝的动态变化

发布时间：2024-10-05 06:45

　　 目的利用活细胞显微成像术对脑微血管内皮细胞内肌动蛋白的动态变化实现实时观察。方法构建绿色荧光蛋白(GFP)标记Lifeact的真核表达载体即Lifeact-pEGFP,利用脂质体转染法将Lifeact-pEGFP质粒转染至脑微血管内皮细胞中,利用共聚焦激光扫描显微镜对Lifeact-pEGFP在细胞内的分布进行分析,并检测其在细胞伸展和迁移过程中的动态变化。结果成功将Lifeact-p EGFP质粒转染至人脑微血管内皮细胞,细胞存活未受到影响。Lifeact-pEGFP能将活细胞中的肌动蛋白丝标记为绿色荧光,并能够有效监测细胞伸展和迁移过程中肌动蛋白丝的动态变化。结论 Lifeact-p EGFP转染结合活细胞显微成像术可以用于实时记录和分析脑微血管内皮细胞内肌动蛋白丝的动态变化。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 细胞：
        1.1.2 主要试剂：
    1.2 方法
        1.2.1 质粒构建和鉴定：
        1.2.2 细胞培养：
        1.2.3 细胞转染：
        1.2.4 细胞增殖实验：
        1.2.5 免疫荧光染色：
        1.2.6 细胞伸展实验：
        1.2.7 细胞划痕实验：
    1.3 统计学分析
2 结果
    2.1 Lifeact-pEGFP质粒的构建和鉴定
    2.2 Lifeact-pEGFP的表达不影响BMEC的存活
    2.3 BMEC中表达的Lifeact-pEGFP与肌动蛋白丝呈共定位
    2.4 Lifeact-pEGFP的表达可以显示BMEC在伸展过程中肌动蛋白丝的动态变化
    2.5 Lifeact-pEGFP能够标记运动细胞前导缘肌动蛋白丝的动态变化
3 讨论



本文编号：4007665