同轴流动聚焦法制备携氧载吲哚菁绿微球用于双模态显像及卵巢癌细胞治疗的实验研究

发布时间：2018-05-18 10:08

本文选题：多功能微球 + 同轴流动聚焦　；参考：《重庆医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：第一部分携氧载吲哚菁绿微球的制备及其性质检测目的:制备一种携氧载吲哚菁绿微球并评价其特性。方法:采用同轴流动聚焦法制备携氧载吲哚菁绿微球,观察其形态和颜色,检测其粒径、粒度分布、光学性质、稳定性、释氧能力、包封率及载药量。结果:携氧载吲哚菁绿微球为圆形,大小均匀,呈淡绿色,平均粒径为(37.5±4.3)μm、包封率为(98.39±1.18)%、载药量为(0.02±0.005)%,携氧载吲哚菁绿微球在超声下具有释氧能力。与吲哚菁绿水溶液相比,荧光稳定性显著提高。结论:用同轴流动聚焦的方法能成功制备携氧载吲哚菁绿微球,有望成为卵巢癌的一种新型双模态显影和治疗方式。第二部分超声介导携氧载吲哚菁绿微球双模态显影的研究目的:观察超声介导携氧载吲哚菁绿微球作为荧光及超声显影剂的显像效果。方法:用低强度聚焦超声辐照携氧载吲哚菁绿微球溶液,在显微镜下观察微球相变情况,用超声显像仪检测相变前后的超声影像情况,用小动物成像仪检测携氧载吲哚菁绿微球的荧光显像深度,观察相变前后的荧光显像,并与同浓度的吲哚菁绿水溶液相比,荧光显像的变化情况。然后运用图像后处理软件对图像的荧光强度进行量化分析。结果:在超声参数为1 MHz,1 W/cm2连续作用30 s的情况下,携氧载吲哚菁绿微球相变为微泡,粒径增大约6倍,同时观察到超声显影明显增强;与吲哚菁绿溶液及激发后的携氧载吲哚菁绿微球相比,激发前的携氧载吲哚菁绿微球在琼脂糖凝胶各个深度的荧光强度都是最强的,且最大深度达1.5 cm,而携氧载吲哚菁绿微球在低强度聚焦超声辐照后,荧光强度变弱,但仍然显著高于同浓度下的吲哚菁绿水溶液,吲哚菁绿水溶液的荧光强度最深只有1 cm。结论:低强度超声辐照携氧载吲哚菁绿微球可以致其发生液气相变,同时能够显著增强超声的显影,携氧载吲哚菁绿微球能显著增强荧光的组织穿透性,可用于超声/荧光双模态显像。第三部分超声介导携氧载吲哚菁绿微球对卵巢癌细胞凋亡和杀伤效应的研究目的:探讨超声介导携氧载吲哚菁绿微球对卵巢癌SKOV-3细胞毒性作用及机制。方法:用单线态氧检测试剂盒在无细胞溶液中检测超声介导对照组、携氧载吲哚菁绿微球组和携氧载吲哚菁绿+叠氮化钠组的单线态氧产生情况。采用对数生长期的SKOV-3细胞,随机分成3组:(1)培养液空白对照组(对照组),(2)超声组(US组),(3)携氧载吲哚菁绿微球+超声组(OI-MPs+US组)分别给予相应处理,6h后用Hochest 33342/PI染色,在显微镜下观察各组的细胞形态和凋亡特异性荧光显像,并用Annexin V-FITC/PI双染法检测各组凋亡情况,24小时后用MTT法检测各组细胞的增殖抑制率。结果:与对照组(16.66±2.89)%和Na N3+OI-MPs+US组(21.30±5.04)%相比,OI-MPs+US组(107.39±8.01)%的单线态氧产生量显著增高(P0.05)。荧光显微镜结果表明,各处理因素作用6 h后,对照组显示淡蓝色荧光,基本没有红色荧光,与对照组相比,US组基本无明显变化,而OI-MPs+US组可见大量细胞皱缩、变圆和明显的亮蓝色荧光和和红色荧光。流式细胞实验结果显示阴性对照组、US组和OI-MPs+US组的凋亡率分别为(3.10±0.52)%,(5.93±0.94)%和(34.11±3.57)%,OI-MPs+US组的细胞凋亡率显著高于对照组和US组(P0.05),各处理组分别作用24小时后MTT结果显示OI-MPs+US组的细胞存活率为(49.97±6.29)%,显著低于超声组(96.73±3.14)%(P0.05)。结论:超声介导的携氧载吲哚菁绿微球能显著增强单线态氧的产量,促进细胞凋亡,降低卵巢癌SKOV-3细胞的存活率,机制可能与超声介导OI-MPs产生单线态氧和空化作用有关。
[Abstract]:A new type of indocyanine green microsphere was prepared by using co - axial flow focusing method . The results showed that the fluorescence intensity of the indocyanine green microspheres was ( 98.39 卤 1.18 ) % , the entrapment efficiency was ( 98.39 卤 1.18 ) % , the entrapment efficiency was ( 98.39 卤 1.18 ) % , the fluorescence intensity of the indocyanine green microspheres was only 1 cm at the same concentration . In comparison with control group ( 16.66 卤 2.89 ) % and NaN3 + OI - MPs + US group ( 21.30 卤 5.04 ) % , the apoptosis rate of OI - MPs + US group was ( 3.10 卤 0.52 ) % , ( 5.93 卤 0.94 ) % and ( 34.11 卤 3.57 ) % , respectively .
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.31

【参考文献】