腹泻仔猪源E.coli的分离及毒力因子分子流行情况调查

发布时间：2017-10-23 02:09

  本文关键词：腹泻仔猪源E.coli的分离及毒力因子分子流行情况调查

  更多相关文章： 大肠杆菌 仔猪腹泻 耐药性 毒素 黏附素

【摘要】：致病性大肠杆菌是引起仔猪腹泻的重要病原之一,给养猪业带来了严重的经济损失。为了了解湖南省部分地区腹泻仔猪源大肠杆菌的耐药性、毒力基因的流行情况,本研究从规模猪场腹泻仔猪中分离出705株腹泻仔猪源大肠杆菌,进行了以下相关试验：1.从9个猪场采集腹泻仔猪的肛门拭子和2011-2014年本实验室接收送检的PEDV(+)腹泻仔猪病料,利用麦康凯平板、革兰氏染色镜检和PCR方法共鉴定705株大肠杆菌。并通过K-B法检测各猪场分离的大肠杆菌对5类抗生素(四环素类、磺胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、头孢类)中的9种药物的耐药性。结果显示：各猪场分离的大肠杆菌群体上对头孢噻吩、头孢曲松、恩诺沙星、阿米卡星的耐药性较低,对氧氟沙星、氟苯尼考、强力霉素、复方新诺明、链霉素的耐药性较高。2.利用多重PCR方法对705株大肠杆菌分离株进行毒素基因(STa、STb、LT1、Stx2e、 eaeA)和黏附素基因(F4、F5、F6、F41、F18ab、F18ac)的检测。结果表明：共175株大肠杆菌检出毒素基因,检出率达24.5%(175/705)；共57株大肠杆菌检出黏附素基因,检出率达8.0%(57/705)；共22株大肠杆菌能同时检测出毒素基因和黏附素基因,检出率达3.1%(22/705)；根据毒素特征可将毒素基因阳性菌株分为五类：产肠毒素大肠杆菌(ETEC)、产志贺毒素大肠杆菌(STEC)、吸附消除型大肠杆菌(AEEC)、产肠毒素大肠杆菌/产志贺毒素大肠杆菌(ETEC/STEC)和吸附消除型大肠杆菌/产志贺毒素大肠杆菌(AEEC/STEC),统计发现分别占毒素基因阳性菌株的68.6%(120/175)、37.3%(28/175)、5.1%(9/175)、8.6%(15/175)和1.7%(3/175),说明本文分离的腹泻仔猪源大肠杆菌以ETEC为主。3.另外,本研究还采用PCR方法对这705株大肠杆菌分离株进行溶血素基因(H1yA)和HPI毒力岛基因(irp2)检测,阳性率分别为：8.4%(60/705)和32.9%(235/705)。
【关键词】：大肠杆菌 仔猪腹泻 耐药性 毒素 黏附素
【学位授予单位】：湖南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S852.61
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 符号说明9-10
• 第一章 文献综述10-25
• 1.1 大肠杆菌生物学特性及分类10-11
• 1.1.1 大肠杆菌生物学特性10
• 1.1.2 大肠杆菌分类10-11
• 1.2 仔猪大肠杆菌病11-13
• 1.2.1 新生仔猪大肠杆菌性腹泻11-12
• 1.2.2 断奶仔猪腹泻12
• 1.2.3 水肿病12-13
• 1.3 仔猪大肠杆菌病的免疫防制13-16
• 1.3.1 全菌疫苗13
• 1.3.2 菌毛疫苗13-14
• 1.3.3 肠毒素疫苗14
• 1.3.4 基因工程疫苗14-15
• 1.3.5 商品化菌苗15-16
• 1.4 大肠杆菌耐药性研究统计16-17
• 1.5 大肠杆菌常见毒力因子17-21
• 1.5.1 黏附素17-19
• 1.5.2 肠毒素19-20
• 1.5.3 其他毒力因子20-21
• 1.6 常见毒力因子的流行病学调查21-24
• 1.6.1 国外流行情况21-22
• 1.6.2 国内流行情况22-24
• 1.7 本研究的目的及意义24-25
• 第二章 不同规模猪场腹泻仔猪大肠杆菌的分离鉴定及药物敏感性检测25-31
• 2.1 材料与方法25-26
• 2.1.1 材料25
• 2.1.2 方法25-26
• 2.2 结果26-29
• 2.2.1 采样猪群的临床资料26-27
• 2.2.2 细菌分离鉴定结果27-28
• 2.2.3 药物敏感性结果28-29
• 2.3 讨论与分析29-30
• 2.4 小结30-31
• 第三章 2011-2014年流行性腹泻阳性仔猪源大肠杆菌的分离鉴定及药物敏感性检测31-36
• 3.1 材料与方法31
• 3.1.1 病料31
• 3.1.2 方法31
• 3.2 结果31-34
• 3.2.1 PEDV阳性病料的临床背景资料31-33
• 3.2.2 细菌分离鉴定结果33
• 3.2.3 药物敏感性检测结果33-34
• 3.3 讨论与分析34-35
• 3.4 小结35-36
• 第四章 腹泻仔猪源大肠杆菌毒力因子的流行病学调查36-58
• 4.1 材料与方法36-39
• 4.1.1 调查大肠杆菌来源的选择36-37
• 4.1.2 大肠杆菌毒力基因的PCR检测37-39
• 4.2 结果39-51
• 4.2.1 大肠杆菌各毒力因子的鉴定结果39-45
• 4.2.2 各猪场及PEDV(+)中大肠杆菌毒力基因检测结果45-46
• 4.2.3 毒素基因、黏附素基因、溶血素基因及毒力岛基因的相关性46-49
• 4.2.4 数据分类统计结果49-51
• 4.3 讨论与分析51-56
• 4.3.1 主要毒力基因调查结果分析51-52
• 4.3.2 大肠杆菌分离株主要毒力因子检测结果与临床发病相关性分析52-55
• 4.3.3 溶血活性表型与溶血素基因(HlyA)鉴定结果的相关性分析55
• 4.3.4 临床上不同阶段腹泻仔猪源大肠杆菌毒力因子检测结果分析55
• 4.3.5 PEDV(+)病料中大肠杆菌毒力因子检测结果分析55-56
• 4.3.6 大肠杆菌病的防控56
• 4.4 小结56-58
• 全文总结58-59
• 参考文献59-68
• 附录1 主要试剂配方68-69
• 附录2 各猪场大肠杆菌毒力因子检测结果69-76
• 致谢76-77
• 作者简历77

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本文编号：1081113