圈养非人灵长类动物肠道菌测定及水苏糖对肠道菌群的影响

发布时间：2017-10-25 06:19

  本文关键词：圈养非人灵长类动物肠道菌测定及水苏糖对肠道菌群的影响

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【摘要】：试验主要以福州动物园圈养条件下灵长类动物为研究对象,采用实时荧光定量PCR (qPCR)的方法定量分析其粪便样品中双歧杆菌、乳酸杆菌及大肠杆菌含量。通过分析粪便中菌群的含量,间接研究现有饲养条件下,灵长类肠道健康状况及菌群结构；以福州动物园兽类表演场笼养的猕猴为试验动物,饲喂6w双歧杆菌促生长因子——水苏糖(功能性低聚糖),观察水苏糖对猕猴粪便菌群结构的影响,分析水苏糖调节肠道菌群结构的机制。同时,采集猕猴血液,检测饲喂水苏糖后猕猴血液生理生化指标的变化,分析水苏糖促进机体代谢及作用机理。(1)对福州动物园圈养猕猴、绿狒、环尾狐猴和黑帽悬猴粪便菌群进行定量检测后对比分析,得出粪便中双歧杆菌平均数量：猕猴为4.5×107CFU·g-1、绿狒为7.9×107CFU·g-1、环尾狐猴为1.9×108CFU·g-1、黑帽悬猴为1.4×108CFU·g-1,其中环尾狐猴极显著高于猕猴(P0.01),黑帽悬猴显著高于猕猴(P0.05)；猕猴幼年体和老年体有显著差异(P0.05)；绿狒幼年体和老年体有显著差异(P0.05)；环尾狐猴幼年体与成年体有显著差异(P0.05)。粪便中的乳酸杆菌平均数量猕猴为4.1×106CFU·g-1、绿狒为4.8×10CFU·g-1、环尾狐猴为9.3×106CFU·g-1、黑帽悬猴为9.3×106CFU·g-1,猕猴与环尾狐猴,猕猴与黑帽悬猴之间差异极显著(P0.01),绿狒与环尾狐猴,绿狒与黑帽悬猴之间差异显著(P0.05)；不同种类的不同年龄段之间只有猕猴成年体与老年体之间差异显著(P0.05)。粪便中大肠杆菌平均数量猕猴为1.1×107CFU·g-1绿狒为8.5×106CFU·g-1环尾狐猴为46×106CFU·g-1、黑帽悬猴为4.3×106CFU·g-1,其中猕猴与环尾狐猴,猕猴与黑帽悬猴之间差异显著(P0.05)；不同种类的不同年龄段之间无明显差异(P0.05)。(2)将福州动物园兽类表演场笼养猕猴分为幼年组、成年组及老年组,同时设立对照组,在为期6w的水苏糖饲喂过程中定量检测了猕猴粪便双歧杆菌、乳酸杆菌及大肠杆菌的数量变化。结果表明,试验组双歧杆菌在1～2w增长显著(P0.01),不同年龄段均有增加,幼年体、成年体和老年体3～6w增长趋势降低,最终可达109CFU·g-1以上。乳酸杆菌在试验期间增长趋势较慢,但0～6w不同年龄段均有2～4倍的数量变化(P0.05)。大肠杆菌数量在试验期间不同年龄段有显著减少(P0.05)。(3)对水苏糖饲喂试验前后猕猴血液生理生化指标进行比较分析。结果显示,红细胞、淋巴细胞、血液总蛋白、白蛋白、腺苷脱氨酶、载脂蛋白、胆固醇、甘油三酯、HDL胆固醇和血钙等指标有显著提高(P0.05)。谷丙转氨酶含量减少极显著(P0.01),表明水苏糖可以显著的影响血液胆固醇、甘油三酯等脂类在体内的代谢,对血钙也有良好的吸收促进作用。因此水苏糖可以通过改善猕猴肠道菌群结构,促进机体营养物质消化吸收,提高猕猴的免疫机能和抗病能力。
【关键词】：灵长类 双歧杆菌 乳酸杆菌 水苏糖 血液生理生化指标
【学位授予单位】：福建农林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S852.6
【目录】：

• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 综述12-22
• 1 灵长类肠道菌群概况12-16
• 1.1 肠道微生态结构分布概述及研究进展12-13
• 1.2 动物肠道有主要生物学意义的微生物概述13-14
• 1.3 肠道菌群的生理功能14-15
• 1.4 肠道菌群紊乱15-16
• 1.4.1 肠道菌群紊乱的原因15-16
• 1.4.2 肠道菌群紊乱的预防和治疗16
• 2 水苏糖促进益生菌增殖对肠道微生态的调节作用16-18
• 2.1 益生菌16-17
• 2.1.1 双歧杆菌16
• 2.1.2 乳酸杆菌16-17
• 2.2 双歧杆菌和乳酸杆菌对宿主的主要生理意义17
• 2.2.1 定植抗力作用17
• 2.2.2 免疫屏障作用17
• 2.2.3 其它作用17
• 2.3 水苏糖对双歧杆菌的增殖作用17-18
• 2.3.1 双歧杆菌促生长因子17-18
• 2.3.2 双歧杆菌对水苏糖的发酵机理18
• 3 肠道菌群研究的主要方法18-20
• 3.1 经典研究方法18
• 3.2 现代分子生物学研究方法18-20
• 3.2.1 16S rDNA PCR技术19
• 3.2.2 指纹图谱技术19
• 3.2.3 核酸探针技术19
• 3.2.4 实时荧光定量PCR技术19-20
• 4 粪便菌群的影响因素20
• 4.1 年龄对双歧杆菌的影响20
• 4.2 饮食对双歧杆菌的影响20
• 5 粪便细菌总DNA的提取技术20
• 6 本试验的研究目的和意义20-22
• 第一章 福州动物园灵长类动物肠道菌群定量分析22-32
• 1 材料和方法22-28
• 1.1 材料22
• 1.1.1 主要试验试剂22
• 1.1.2 主要试验仪器22
• 1.2 试验方法22-28
• 1.2.1 试验动物调查及样品采集22-23
• 1.2.2 PCR引物设计23-24
• 1.2.3 粪便细菌全基因组DNA提取24
• 1.2.4 双歧杆菌、乳酸杆菌及大肠杆菌外标准品提取及保存24-25
• 1.2.4.1 普通PCR扩增目的片段24-25
• 1.2.4.2 双歧杆菌标准品制备25
• 1.2.4.3 乳酸杆菌标准品制备25
• 1.2.4.4 大肠杆菌标准品制备25
• 1.2.5 双歧杆菌、乳酸杆菌及大肠杆菌qPCR分析25-26
• 1.2.6 双歧杆菌、乳酸杆菌及大肠杆菌标准曲线26-27
• 1.2.7 溶解曲线与假阳性27-28
• 2 数据统计与处理28
• 3 结果28-30
• 3.1 不同灵长类粪便菌群定量比较分析28-29
• 3.2 双歧杆菌qPCR检测结果29
• 3.3 乳酸杆菌qPCR检测结果29-30
• 3.4 大肠杆菌qPCR检测结果30
• 4 讨论30-32
• 第二章 水苏糖对福州动物园猕猴肠道菌群的影响32-37
• 1 材料和方法32-33
• 1.1 材料32-33
• 1.1.1 试验动物32-33
• 1.1.2 主要试验材料及仪器33
• 1.2 方法33
• 1.2.1 饲养试验33
• 1.2.2 粪便样品采集33
• 1.2.3 粪便样品细菌全DNA提取33
• 1.2.4 双歧杆菌、乳酸杆菌及大肠杆菌qPCR分析33
• 2 数据统计与处理33
• 3 结果与分析33-35
• 3.1 水苏糖对猕猴肠道双歧杆菌的影响33-34
• 3.2 水苏糖对猕猴肠道乳酸杆菌的影响34
• 3.3 水苏糖对猕猴肠道大肠杆菌的影响34-35
• 3.4 水苏糖水苏糖对灵长类粪便外观变化的影响35
• 4 讨论35-37
• 第三章 水苏糖对福州动物园猕猴血液生理机能的影响37-42
• 1 材料和方法37
• 1.1 材料37
• 1.1.1 试验动物37
• 1.1.2 主要试验材料及仪器37
• 1.2 方法37
• 1.2.1 饲养试验37
• 1.2.2 血液样品采集37
• 1.2.5 血液生理生化指标检测37
• 2 数据统计与处理37
• 3 结果与分析37-40
• 3.1 水苏糖对猕猴血细胞含量的影响37-38
• 3.2 水苏糖对猕猴血液肝功能生化指标的影响38-39
• 3.3 水苏糖对猕猴血液肾功能指标及离子的影响39
• 3.4 水苏糖对猕猴血液蛋白质、脂类和糖类代谢指标的影响39-40
• 4 讨论40-42
• 结论42-43
• 本试验的创新点43
• 本试验不足之处和有待进一步研究的问题43-44
• 参考文献44-50
• 附录一 试验主要仪器50-51
• 附录二 试验主要材料及试剂51-52
• 附录三 饲喂水苏糖前后猕猴粪便的外观变化52-53
• 附录四 猕猴血液生理生化检测报告53-54
• 致谢54

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本文编号：1092440