中华绒螯蟹中ADAMs蛋白在精细胞凋亡过程中的功能研究

发布时间：2017-12-08 09:13

  本文关键词：中华绒螯蟹中ADAMs蛋白在精细胞凋亡过程中的功能研究

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【摘要】：生殖细胞凋亡的调节对维持正常的精子发生非常重要。在脊椎动物中,ADAM家族蛋白中的ADAM17和ADAM10已被证明参与精细胞凋亡过程。并且,已有研究证明哺乳动物中的ADAM17和ADAM10通过p38 MAPK信号通路参与精细胞的凋亡调控。但是在中华绒螯蟹中,Es-ADAM17和Es-ADAM10是否参与精细胞凋亡及其分子机制仍然不明。在本文研究中,我们建立了中华绒螯蟹的紫外线诱导的精细胞凋亡模型,并通过分析不同条件下Es-ADAM17和Es-ADAM10的蛋白表达水平,来探究Es-ADAM17和Es-ADAM10基因与中华绒螯蟹精细胞在紫外诱导条件下的精细胞凋亡过程之间的关系。转移酶介导的三磷酸脱氧鸟苷-生物素刻痕末端标记(TUNEL)法检测结果显示,紫外光照射时间越长,在荧光显微镜下组织样本阳性信号越强,中华绒螯蟹的精细胞凋亡率越高。实时荧光定量PCR结果表明,凋亡标记基因Es-caspase和Es-NM23的基因表达量也随着紫外照射时间延长而增长;Es-ADAM17的基因表达量随着光照时间的延长而升高,但Es-ADAM10的基因表达量却随着光照时间的延长而降低。通过,蛋白免疫印迹实验分析,精细胞的凋亡引起Es-ADAM17和Es-ADAM10蛋白表达量的变化,变化趋势与实时荧光定量PCR的趋势相同。这表明Es-ADAM17和Es-ADAM10在中华绒螯蟹的精细胞凋亡中起到相反的作用。在凋亡模型中分别加入ADAM17和ADAM10的抑制剂后的进一步实验表明,Es-ADAM17促进精细胞凋亡,Es-ADAM10抑制精细胞凋亡。在抑制剂的作用下,Es-p38和Es-p53的蛋白磷酸化水平也发生了不同程度的变化。上述研究结果表明,中华绒螯蟹ADAM17和ADAM10可能通过p38MAPK信号通路来调节精细胞的凋亡。
【学位授予单位】：华东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S917.4

【参考文献】

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1 堵南山,薛鲁征,赖伟;中华绒螯蟹精子的研究 Ⅱ.精子发生[J];海洋与湖沼;1988年01期

2 堵南山,赖伟,薛鲁征;中华绒螯蟹精子的研究——Ⅰ.精子的形态及超微结构[J];海洋与湖沼;1987年02期

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本文编号：1265840