无乳链球菌对奶牛乳腺成纤维细胞瘦素和细胞外基质表达的影响

发布时间：2017-12-12 05:31

  本文关键词：无乳链球菌对奶牛乳腺成纤维细胞瘦素和细胞外基质表达的影响

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【摘要】：无乳链球菌(Streptococcus agalctiae,S.agalactiae)是引起奶牛乳腺炎的主要病原菌之一,能够导致奶牛乳腺纤维化。奶牛乳腺成纤维细胞(BMFB)是乳腺组织的主要间质细胞,本研究目的是探讨S.agalactiae对体外培养的BMFB瘦素(Leptin)及其功能性受体(OB-R b)、细胞外基质(ECM)表达的影响,以探索S.agalactiae引起奶牛乳腺纤维化中Leptin与奶牛乳腺纤维化的关系。本研究采用不同浓度热灭活的S.agalactiae(OCFU/mL、105CFU/mL、106CFU/mL和108CFU/mL)作用于体外培养的BMFB,于不同作用时间(6h、12h、24h、48h和72h)提取细胞的总mRNA和总蛋白,采用荧光定量PCR和Westemblot方法检测Leptin及其功能性受体和细胞外基质αα-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠα 1)mRNA及蛋白的表达,采用ELISA方法检测细胞培养上清液中细胞外基质透明质酸(Hyaluronic acid,HA)的表达情况。结果表明:(1)不同浓度的S.agalactiae作用BMFB不同时间后,均可不同程度地促进Leptin及OB-R b mRNA和蛋白的表达。Leptin mRNA和蛋白的表达基本一致,6h、12h105CFU/mL浓度极显著高于对照组(P0.01),24h、48h、72h表达水平基本随着浓度的增加而增加;OB-Rb mRNA和蛋白的表达基本一致,随着浓度的增加而增加,mRNA的表达48h108CFU/mL浓度最大,蛋白的表达12h108CFU/mL浓度最大。(2)不同浓度的S.agalactiae作用于BMFB均能不同程度地促进α-SMA和COLⅠα 1的mRNA及蛋白的表达。α-SMA mRNA和蛋白的表达基本一致,各个作用时间105CFU/mL浓度极显著高于对照组(P0.01),12h表达最大;COLⅠα 1 mRNA和蛋白的表达不一致,mRNA的表达随着时间的延长呈先降低再升高的趋势,24h、48h表达降低,72h再升高,6h 108CFU/mL浓度表达最大,蛋白的表达各个作用时间105CFU/mL、106CFU/mL浓度极显著高于对照组(P0.01),108CFU/mL浓度表达低于对照组。(3)不同浓度的S.agalactiae于BMFB后,细胞培养上清液中HA的表达不同程度地上升,24h106CFU/mL浓度表达最大。综上所述,热灭活的S.agalactiae能够促进体外培养的BMFBLeptin及OB-Rb mRNA和蛋白的表达,与时间和浓度有一定的关系;S.agalactiae作用于BMFB后,三种细胞外基质(α-SMA、COLⅠα 1和HA)的表达均上升。提示Leptin在S.agalactiae致奶牛乳腺纤维化中有一定的作用。
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S858.23

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本文编号：1281371