发光杆菌SN259菌株次生代谢产物的分离鉴定和抑菌活性研究

发布时间：2017-12-15 03:03

  本文关键词：发光杆菌SN259菌株次生代谢产物的分离鉴定和抑菌活性研究

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【摘要】：昆虫病原线虫共生菌属于肠杆菌科(Enterobacteriaceae),寄生于昆虫病原线虫的肠道内,可产生化学结构丰富,且具有抗菌、抗病毒、抗癌、杀虫等生物活性的代谢产物,在农业和医药卫生领域具有较大开发潜力和应用前景,已成为一类重要的新型微生物资源。本文通过对采自辽宁丹东、内蒙扎兰屯、吉林长白山的108个土样进行大蜡螟生物诱导得到57株初生型昆虫病原线虫共生菌,通过化学筛选与生物活性筛选相结合的方法对共生菌进行初筛,得到最优菌株,鉴定为Photorhabdustemperata,对该菌株的次生代谢产物进行分离、鉴定、及生物活性测定得出以下主要研究结果:1.优势菌株的筛选:对分离纯化得到的57株初生型共生菌进行小发酵,用大孔树脂吸附法获取共生菌的粗提物。采用TLC检测技术对菌株发酵粗提物进行分析检测,结果表明SN259菌株的发酵粗提物的次生代谢产物种类比较丰富。采用菌丝生长速率法测定菌株粗提物对植物病原真菌的抑制作用。结果表明,SN259菌株的发酵粗提物对瓜果腐霉,水稻纹枯病菌,禾谷镰刀病菌,玉米大斑病菌的菌丝生长均具有明显抑制作用,当浓度为50μg/mL,对四株真菌的抑制率分别为72%,51%,38%,41%。因此选定SN259菌株为最优菌株。2.SN259菌株的鉴定:PCR扩增SN259菌株的16SrRNA全序列,通过构建系统发育树进行16S rRNA序列同源性比较及聚类分析。结果显示SN259菌株与发光杆菌Photorhabdustemperata(GenBank accession number EU136626)的同源性为 100%,表明SN259 菌株与 Photorhabdus temperata 为同种,命名为Photorhabdus temperata SN259(GenBank accession number KU240002).3.SN259菌株次生代谢产物的分离纯化及鉴定:对发光杆菌SN259菌株进行液体发酵得到粗提物。然后利用柱层析技术与半制备高效液色谱技术相结合的方法对SN259菌株的次生代谢产物进行分离纯化,得到7个单体化合物,经核磁共振波谱及高分辨质谱分析,并结合相关文献,鉴定为:3-羟基-2-异丙基-5-苯乙基苯基氨基甲酸酯(1),2-(1-羟基丙烷-2-基)-5-[2-苯乙基]苯-1,3-二醇(2),2-(1-羟基丙烷-2-基)-5-[(E)-2-苯乙烯基]苯-1,3-二醇(3),2-乙基-5-(2-苯乙基)苯-1,3-二醇(4),2-异丙基-5-[2-苯乙基]苯-1,3-二醇(5),2-乙基-5[(E)2-苯乙烯基]苯-1,3-二醇(6),2-异丙基-5-[(E)-2-苯乙烯基]苯-1,3-二醇(7)。以上7个单体化合物均为二苯乙烯类化合物,命名为化合物1-7。其中化合物1-3为新化合物,化合物4为新的天然产物,化合物5-7为已知化合物。4.化合物生物活性测定及构效分析:通过菌丝生长速率法和微量肉汤稀释法测定化合物1-7的抑真菌活性,结果表明新化合物1和化合物7活性较强。在菌丝生长速率试验中化合物1和化合物7对瓜果腐霉的IC50分别为2.8 μg/mL和2.7 μg/mL,与百菌清的效果相近。在含药平板试验中,化合物1和化合物7也对瓜果腐霉表现出较好的抑制作用,IC50值分别为2.4μg/mL和1.9μg/mL。虽然化合物的结构非常类似,但其生物活性具有较大的差异,进一步进行构效分析,结果表明,酰胺基及异丙基对于维持化合物的生物活性是至关重要的。
【学位授予单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S476

【参考文献】

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1 吕秋军,简恒,刘卫京,杨秀芬,温利青,陈媛媛,郭绍明,曲艳燕,董俊兴;从嗜线虫杆菌分离的吲哚衍生物抗肿瘤活性的研究[J];中国新药杂志;2002年11期

2 徐洁莲;昆虫病原线虫发光杆菌的分离和鉴定[J];昆虫天敌;1986年03期

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本文编号：1290351