安徽及周边地区羊肠道寄生虫病流行病学调查

发布时间：2017-12-15 05:02

本文关键词：安徽及周边地区羊肠道寄生虫病流行病学调查

【摘要】：为了解安徽及周边地区绵羊和山羊肠道寄生虫感染情况,从安徽省及周边的河南省、江苏省和山东省部分地区的7个规模化绵羊场和10个规模化山羊场分别采集了 832份和781份新鲜绵羊和山羊粪便样品,采用离心沉淀法、卢戈氏碘液染色-镜检法、饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法进行肠道寄生虫调查。结果显示安徽及周边地区绵羊肠道寄生虫感染率为47.60%,山羊感染率为62.87%。绵羊共检出球虫、毛圆线虫、类圆线虫、细颈属线虫、莫尼茨绦虫、贾第虫、阿米巴原虫和人芽囊原虫等虫种,山羊共检出球虫、毛圆线虫、类圆线虫、细颈属线虫、莫尼茨绦虫、贾第虫、阿米巴原虫、前后盘吸虫、鞭虫和隐孢子虫等虫种。其中,绵羊以球虫和阿米巴原虫为主要感染虫种,感染率分别为22.60%(188/832)和17.55%(146/832)。山羊以球虫和圆线虫为主要感染虫种,感染率分别为32.39%(253/781)和37.39%(292/781)。本次调查发现,绵羊和山羊多呈混合感染,且感染强度较大。其中,绵羊以球虫和阿米巴原虫混合感染最为常见,混合感染率为33.63%(38/113),以山东泰安的混合感染率最高,达91.67%(55/60)。山羊以球虫和圆线虫混合感染最为常见,混合感染率为51.72%(120/234),以河南洛宁的混合感染率最高,达70.82%。各感染虫种中,绵羊和山羊分别以球虫和毛圆线虫感染强度最大,平均EPG/OPG值分别为1020和3640。为进一步确定安徽及周边地区绵羊和山羊隐孢子虫的流行及基因型分布情况,对采集的新鲜绵羊和山羊粪便样品,提取所有粪便样品基因组DNA,利用隐孢子虫18s rRNA基因特异的巢氏PCR对所有样品进行检测,确定上述地区绵羊和山羊隐孢子虫感染情况,同时对获得的阳性扩增产物进行gp60基因扩增与分析,以鉴定其基因亚型。结果显示绵羊隐孢子虫总感染率为5.77%(48/832),其中江苏吴江感染率最高,为49.33%(37/75),其次是安徽蚌埠,感染率为3.19(11/345),其余地区未见感染。山羊隐孢子虫总感染率为8.71%(68/781),其中安徽马鞍山感染率最高,为46.00%(46/100),其次是安徽安庆和阜阳,感染率分别为10.09%(11/109)和7.64%(11/144),其余地区未见感染。18s rRNA基因序列分析显示绵羊隐孢子虫虫种分别为Cxiao.(27)和C.ubiquitum(21),山羊隐孢子虫虫种均为C.parvun(68)。gp60基因分析显示绵羊C.ubiquitu 基因亚型均为XIIa(19),山羊C.parvum基因亚型均为IIdA19G1(54)。为进一步确定安徽及周边地区绵羊和山羊毕氏肠微孢子虫的流行及基因型分布情况,对上述绵羊和山羊粪便样品基因组DNA,利用毕氏肠微孢子虫特异的巢氏PCR进行检测,确定上述地区绵羊和山羊毕氏肠微孢子虫感染情况,同时对获得的阳性扩增产物进行测序,利用生物信息学方法分析其基因型。结果显示绵羊毕氏肠微孢子虫感染率为3.37%(28/832),其中蚌埠检获7个阳性样品,感染率为2.0%(7/345),马鞍山检获4个阳性样品,感染率为4.0%(4/100),江苏吴江检获16个阳性样品,感染率为21.33%(16/75),山东泰安检获1个阳性样品,感染率为1.67%(1/60)。山羊毕氏肠微孢子虫感染率为4.09%(32/781),其中滁州检获21个阳性样品,感染率为19.09%(21/110),蚌埠检获2个阳性样品,感染率为11.11%(2/18),池州检获7个阳性样品,感染率为9.86%(7/71),徐州检获2个阳性样品,感染率为2.70%(2/74),其余各地未检出山羊毕氏肠微孢子虫阳性样品。生物信息学分析显示本次检获的绵羊毕氏肠微孢子虫基因型分别为COS1(11),OEB1(3),BEB6(7),AHS1(4),AHS2(2)和 SZS1(1),山羊毕氏肠微孢子虫基因型分别为CHG1(13),CHG3(16),AHG2(2)和BEB6(1),其中,AHG1,AHS1,AHS2和SZS1为本次调查发现的新基因型。进化树显示本次获得的虫株均属Group 2。为进一步确定安徽及周边地区绵羊和山羊贾第虫的流行及基因型分布情况,对上述绵羊和山羊粪便样品基因组DNA,先利用贾第虫TPI基因特异的巢式PCR方法对所有样品进行检测,在此基础上,对获得的TPI阳性样品进行基于GDH基因的半巢式PCR扩增,然后对获得的所有PCR产物进行测序,利用生物信息学方法进行序列分析,确定贾第虫基因型。结果显示绵羊贾第虫感染率为0.36%(3/832),山羊感染率为0.0%(0/781)。3个绵羊贾第虫TPI阳性样品成功扩增出2个GDH基因。基于贾第虫TPI基因序列分析显示3个阳性样品集聚体亚型分别为E1(2)和E6(1),基于GDH基因的序列分析显示2个阳性样品均属于集聚体E。为进一步确定安徽及周边地区绵羊和山羊人芽囊原虫的流行及基因型分布情况,对上述绵羊和山羊粪便样品基因组DNA,利用人芽囊原虫特异的PCR方法对所有样品进行检测,确定上述地区绵羊和山羊人芽囊原虫感染情况,同时对获得的阳性扩增产物进行测序,把所获序列提交到人芽囊原虫18S数据库以确定其基因型和18S等位基因情况。结果显示绵羊人芽囊原虫总感染率为6.00%(50/832),其中江苏吴江感染率最高,为24.00%(18/75),其次是山东泰安,感染率为16.67%(10/60),安徽省仅在蚌埠检获人芽囊原虫阳性样品,感染率为6.38(22/345),其余地区未见感染。山羊人芽囊原虫总感染率为0.26%(2/781),仅在马鞍山检获人芽囊原虫阳性样品,感染率为2.00(2/100)。序列分析显示绵羊人芽囊原虫基因型分别为ST4(2),ST5(8),ST10(25),ST14(10),新型 1(3),新型2(1)和新型3(1),山羊人芽囊原虫基因型均为ST1(2)。18s等位基因分析显示绵羊基因型ST4、ST14和ST10和山羊基因型ST1均只有一个等位基因,分别为allele2,allele42,allele 19和allele43,绵羊基因型ST5有2个等位基因,分别为allele115和allele119。为进一步确定安徽及周边地区绵羊和山羊人五毛滴虫的流行及分子特性情况,对上述绵羊和山羊粪便样品基因组DNA,利用人五毛滴虫特异的巢式PCR方法对所有样品进行检测,了解上述地区绵羊和山羊人五毛滴虫感染情况,同时对获得的阳性扩增产物进行测序,利用生物信息学方法对人五毛滴虫的阳性序列进行分子分析。结果显示本次调查绵羊样品中均未发现人五毛滴虫阳性样品。山羊人五毛滴虫总感染率为0.26%(2/781),且均分布在河南洛阳,感染率为1.83%(2/109)。基因分析显示2份山羊人五毛滴虫分离物18SrRNA基因与在犬、人和猴等动物群中广泛分布的人五毛滴虫CC1基因型完全一致。
【学位授予单位】：安徽科技学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S858.26;S858.27

【参考文献】

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