PHEV感染巨噬细胞对Ⅰ型干扰素抑制作用的研究

发布时间：2017-12-16 18:04

  本文关键词：PHEV感染巨噬细胞对Ⅰ型干扰素抑制作用的研究

  更多相关文章： 猪血凝性脑脊髓炎 IFN MDA5 巨噬细胞 先天性免疫

【摘要】：猪血凝性脑脊髓炎(porcine hemagglutinating encephalomyelitis,PHE)是由猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)引起猪的一种传染病。根据该病的主要特征,可分为两种类型,一种是以呕吐症状为主的呕吐消耗型,另一种是以神经症状为主的脑脊髓炎型。目前,该病在包括我国在内的多个国家均有发生和流行,给养猪业带来了巨大的经济损失。动物机体在病毒感染早期,参与先天性免疫的细胞会分泌I型干扰素(I-interferon,I-IFN)来抵抗病毒的侵害,但有的病原感染会通过多种逃避机制避免I-IFN对其影响。PHEV感染早期,机体是否会通过分泌这一细胞因子来发挥一定的抗病毒作用,目前还不清楚。I-IFN是参与先天性免疫应答的重要细胞因子,为了解PHEV感染机体后I-IFN的分泌情况,本实验用PHEV感染BALB/c小鼠,待第5 d病毒复制量达到最高峰时,提取脑和脊髓总蛋白,通过ELISA方法对IFN-β含量进行检测。结果显示,脊髓中检测出的量和空白对照组相比无显著性差异,脑组织中IFN-β分泌量也仅为80 ng/L,说明PHEV虽然可以在脑和脊髓中复制,却不具备高诱导IFN-β表达的能力,这有可能是PHEV引起神经症状的重要原因,上述研究表明,PHEV体内感染,可逃避IFN-β的免疫识别。PHEV感染机体后,可突破外周免疫系统,本课题组的前期研究发现,DC识别PHEV后不能通过分泌I-IFN方式发挥抗病毒作用。巨噬细胞作为机体另一种重要的外周免疫细胞,其对病毒的处理能力以及产生的先天性免疫反应尚不清楚。我们首先对病毒在巨噬细胞中的复制情况进行检测,即将PHEV感染腹腔巨噬细胞、RAW和J774A.1细胞24 h,免疫荧光检测发现,三种细胞均呈现病毒阳性信号,此结果表明病毒可以感染并在巨噬细胞中复制增殖。巨噬细胞是I-IFN的主要来源细胞,为了解PHEV对巨噬细胞IFN-β诱生作用的影响,通过荧光定量PCR法对RAW和J774A.1细胞感染PHEV后IFN-βm RNA进行检测,并以IFN-β产生的强烈诱导剂水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)刺激RAW细胞做阳性对照,结果显示,PHEV感染J774A.1细胞24 h以及VSV感染RAW细胞9 h即可强烈地诱导产生IFN-β,而RAW细胞在病毒感染36 h后才检测到少量的IFN-β,说明PHEV早期诱导这两种巨噬细胞系IFN-β产生的能力被抑制。为说明PHEV感染巨噬细胞对IFN-β蛋白水平的影响,ELISA方法检测PHEV感染腹腔巨噬细胞和两种细胞系IFN-β含量,结果显示PHEV感染24 h,RAW和腹腔巨噬细胞并未检测出IFN-β,J774A.1细胞在感染12 h之前IFN-β也呈基础水平表达,结合定量结果,表明PHEV可以抑制早期巨噬细胞的IFN-β表达。IRF-3是调控I-IFN产生的上游核转录因子,通常存在于胞质中,一旦被激活则由胞质移入胞核。为深入研究巨噬细胞中PHEV对I-IFN的抑制机制,将PHEV感染RAW和J774A.1细胞,通过免疫荧光技术对IRF-3进行核定位检测,结果发现PHEV感染24 h后,IRF-3依然定位于胞质。该结果表明PHEV感染后并未激活巨噬细胞的IRF-3通路,提示我们PHEV可能通过抑制IRF-3或其上游调控因子,进而抑制IFN-β的产生。为了解PHEV感染巨噬细胞发挥作用的模式识别受体,我们用活病毒和灭活病毒同时处理J774A.1细胞,通过荧光定量PCR方法检测发现,PHEV灭活病毒失去了诱导IFN-β分泌的能力,表明胞质模式识别受体可以参与对PHEV的识别。常见的胞质模式识别受体有三种,RIG-I、MDA5、LGP2,为了筛选发挥主要作用的受体,应用RNA干扰技术对RIG-I、MDA5、LGP2进行瞬时沉默。结果显示,PHEV感染24 h后,MDA5瞬时沉默的细胞中IFN-β蛋白水平显著降低,提示MDA5参与了PHEV诱导IFN-β的产生过程。此外,Western blot检测发现,干扰MDA5可以显著增强PHEV的复制能力,表现为病毒蛋白表达水平的显著升高。以上结果表明,MDA5是参与PHEV感染的关键胞质模式识别受体,该通路的激活可以发挥抗PHEV作用。综上所述,PHEV感染巨噬细胞后,可被巨噬细胞内模式识别受体MDA5识别,并通过抑制IFN-β表达而逃避机体的抗病毒天然免疫作用。由此推测,病毒可逃脱外周免疫防御系统进入中枢神经系统发挥致病作用,引起神经损伤。该研究成果揭示了PHEV感染巨噬细胞过程中宿主关键模式识别受体及其抗病毒天然免疫作用,可为后期深入研究PHEV逃逸宿主先天性免疫识别机制提供参考依据。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S852.65

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4 于立坚,马润娣,朱娟莉;阻断巨噬细胞机能对小鼠的影响[J];动物学杂志;1981年02期

5 王学诚;;巨噬细胞与肿瘤细胞的相互作用[J];细胞生物学杂志;1984年04期

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9 金卫根;巨噬细胞的生理机能[J];抚州师专学报;1996年03期

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2 吴国明;周辉;;巨噬细胞和创伤纤维化[A];2009年浙江省骨科学学术年会论文汇编[C];2009年

3 李奇;王海杰;;透明质酸对于淋巴结巨噬细胞运动的影响[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

4 刘革修;欧大明;刘军花;黄红林;廖端芳;;丙丁酚在体外能抑制巨噬细胞脂质氧化介导的低密度脂蛋白氧化并调节氧化巨噬细胞的分泌功能[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展（下册）[C];1999年

5 叶金善;杨丽霞;郭瑞威;;环氧化酶-2/前列腺素E_2在血管紧张素Ⅱ刺激巨噬细胞表达细胞外基质金属蛋白酶诱导因子中的作用[A];第十三次全国心血管病学术会议论文集[C];2011年

6 秦帅;陈希;孔德明;;构建由绿色荧光标记巨噬细胞的转基因斑马鱼系[A];贵州省中西医结合内分泌代谢学术会论文汇编[C];2012年

7 武剑华;徐惠绵;;肿瘤相关巨噬细胞在胃癌中的相关研究[A];第9届全国胃癌学术会议暨第二届阳光长城肿瘤学术会议论文汇编[C];2014年

8 何军;;血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体升高巨噬细胞内胆固醇水平[A];中华医学会第11次心血管病学术会议论文摘要集[C];2009年

9 宋盛;周非凡;邢达;;PDT诱导的凋亡细胞对巨噬细胞NO合成的影响[A];第七届全国光生物学学术会议论文摘要集[C];2010年

10 张磊;朱建华;黄元伟;姚航平;;血管紧张素Ⅱ对巨噬细胞(THP-1重细胞)凝集素样氧化低密度脂蛋白受体表达的影响[A];浙江省免疫学会第五次学术研讨会论文汇编[C];2004年

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4 记者 胡德荣;铁泵蛋白“维稳”铁代谢作用首次阐明[N];健康报;2011年

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8 本报记者 侯嘉 通讯员 何新乡;今天你补硒了吗[N];医药经济报;2003年

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