重组PEDV-S1枯草芽孢杆菌免疫原性研究

发布时间：2017-12-17 00:25

  本文关键词：重组PEDV-S1枯草芽孢杆菌免疫原性研究

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【摘要】：猪流行性腹泻病毒(PEDV)能够引起仔猪严重腹泻,给养猪业带来巨大经济损失。PEDV S蛋白是能够产生中和抗体的主要结构蛋白。枯草芽孢杆菌是一种非致病性、绿色安全的益生菌,被证明能够成功用于抗原呈递。为构建PEDV S蛋白的重组枯草芽孢杆菌表达系统,获得PEDV候选微生态制剂,达到预防PED的目的。本研究以PEDV S1基因为目的基因,以枯草芽孢杆菌为递呈载体,鉴定了重组枯草芽孢杆菌pLA-PEDVS1/Bacillus subtilis。通过Western blot、间接免疫荧光与流式细胞术检测重组蛋白的表达。Western blot检测到大小为81 kDa的蛋白,即外源蛋白能够与猪源PEDV抗血清结合,说明目的蛋白具有良好的反应原性。间接免疫荧光与流式细胞术检测表明外源蛋白PEDV S1获得了表达。为研究重组菌pLA-PEDV-S1/Bacillus subtilis的免疫原性,本实验以小鼠为动物模型,通过灌胃方式口服重组枯草芽孢杆菌。在免疫后不同时间采集小鼠血液、粪便、气管洗液和小肠洗液,测定特异性IgG水平、IgG亚类水平和特异性sIgA水平。通过MTT法检测T淋巴细胞的增殖能力,中和试验检测特异性抗体对病毒的反应。实验结果表明,pLA-PEDV-S1/B.Subtilis在免疫小鼠后,小鼠血清抗PEDV的特异性IgG抗体水平升高;对粪便样品、气管洗液和小肠洗液的检测发现抗PEDV特异性s IgA抗体水平明显增高;IgG亚类分析结果表明IgG1是产生的主要抗体,其次是IgG2a和IgG2b;特异性血清IgG和肠洗液sIgA抗体能够中和PEDV;T淋巴细胞增殖试验结果表明试验组的SI显著高于对照组。综上所述,重组枯草芽孢杆菌pLA-PEDV-S1/B.Subtilis免疫小鼠产生了黏膜免疫和系统免疫。
【学位授予单位】：黑龙江八一农垦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S852.4

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本文编号：1298055