苹果几丁质酶基因的克隆与功能分析

发布时间：2017-12-18 15:00

  本文关键词：苹果几丁质酶基因的克隆与功能分析

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【摘要】：几丁质是真菌细胞壁重要的结构组成性物质,几丁质酶能够降解大多数病原真菌细胞壁中的几丁质,进而抑制真菌生长。几丁质酶抑制真菌生长的特点使它成为目前抗病基因工程育种研究的热点之一。本课题组前期对苹果转录组数据比对分析发现,抗病品种的几丁质酶基因的表达水平明显上调,因此本研究克隆苹果几丁质酶基因全长CDS序列,构建其过表达载体,并利用农杆菌介导的转化法获得苹果和拟南芥的转基因植株,为研究苹果抗病育种提供理论参考。主要研究结果如下:1.依据苹果几丁质酶基因的(MdChi)的序列,从苹果叶片中同源克隆得到MdChi基因全长CDS序列:该序列全长为954 bp,包含完整的开放阅读框,共编码317个氨基酸。生物信息学分析表明:MdChi编码的蛋白质的二级结构中存在大量的α-螺旋、无规则卷曲和少量扩展结构链,属于几丁质酶19家族,具有几丁质酶19家族特有的结构域:C端具有几丁质结合区,N端具有糖苷水解酶保守域。MdChi与已报道的其他植物的几丁质酶基因编码的氨基酸序列具有较高的同源性,与沙梨的同源性高达95%。2.以植物过表达载体pRI 101 AN为骨架,将MdChi全长CDS序列整合到pRI 101 AN载体上,构建苹果MsChi过表达载体,将其命名为pOX-MdChi。3.利用农杆菌介导的叶盘转化法,将MdChi基因导入到苹果中,获得4个苹果转基因植株。利用农杆菌介导的浸花转化法,将MdChi基因导入到拟南芥中,获得4个转基因植株。用灰霉病菌分别接种转基因植株的离体叶片,转基因植株的抗病性均强于对照,这表明MdChi基因的过量表达具有提高植物抗病能力的作用。
【学位授予单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S661.1

【参考文献】

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1 唐梦君;有利利;倪红;;几丁质酶在农业方面的应用研究概况[J];南方农业;2017年01期

2 李俊州;赵玉华;文才艺;臧睿;张俊;;内生细菌EBS05对番茄病程相关蛋白的诱导作用研究[J];河南农业大学学报;2014年05期

3 胡周波;高翔;陈其皎;宋喜悦;陈冬阳;董剑;赵万春;石引刚;;普通小麦中国春Chi基因的克隆、染色体定位及原核表达[J];西北农业学报;2014年08期

4 李志文;张平;刘翔;集贤;;纳他霉素采前处理对葡萄采后灰霉病的抑制效果[J];农业工程学报;2014年09期

5 李保华;王彩霞;董向丽;;我国苹果主要病害研究进展与病害防治中的问题[J];植物保护;2013年05期

6 宋晰;肖露;林东;王艳辉;李波涛;刘西莉;;番茄灰霉病菌对腐霉利的抗药性检测及生物学性状研究[J];农药学学报;2013年04期

7 张玮;乔广行;黄金宝;王忠跃;李兴红;;中国葡萄灰霉病菌对嘧霉胺的抗药性检测[J];中国农业科学;2013年06期

8 李琳琳;李天来;余朝阁;张抗抗;;钙素对SA诱导番茄幼苗抗灰霉病的调控作用[J];园艺学报;2012年02期

9 曹守军;于建水;姚建刚;;胶东地区保护地番茄灰霉病防治药效试验[J];山东农业科学;2011年03期

10 杨小丽;马俊义;胡白石;陈涛;李晓霞;;不同哈密瓜品种苗期对细菌性果斑病的抗病性鉴定[J];新疆农业科学;2008年03期

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1 常琳琳;草莓和苹果DNA甲基转移酶基因分离及表达分析[D];沈阳农业大学;2009年

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本文编号：1304568