番茄SlSWEET11b基因的表达及遗传转化

发布时间：2017-12-23 10:28

  本文关键词：番茄SlSWEET11b基因的表达及遗传转化　出处：《沈阳农业大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：SWEET蛋白是一种新型的糖转运蛋白,在糖的输出转运过程中起重要作用,近来的研究表明SWEET蛋白在拟南芥、水稻中,在离子的转运过程、生长和发育、以及对环境的适应性方面都起着重要作用。本课题组前期研究表明SlSWEETT11b基因在番茄果实中大量表达,该基因在番茄果实发育的过程中所发挥的具体作用还不清楚。本研究通过生物信息学及实时定量PCR方法明确SlSWEE7116基因的特征,并通过构建基因的过表达和沉默载体,采用瞬时表达和稳定遗传转化的方法对SlSlSWEET11b基因的功能进行初步分析,获得的主要结果如下:1.根据番茄数据库获得SlSWWEET11b基因全长1124bp,由375个氨基酸编码,跨膜结构分析表明该基因具有7跨膜结构,包含两个MtN3结构域。与拟南芥SWEET家族的系统进化树分析表明,该蛋白位于CladeⅡ。根据该分支其它SWEET蛋白的功能分析,该蛋白可能主要负责蔗糖和果糖的转运。2.采用实时定量PCR技术,对番茄果实的不同发育时期表达分析,结果表明SlSWEET11b基因在番茄花后21d表达量达到峰值,随后下降。在果实成熟过程中,该基因的表达部位也不尽相同,其中在绿果期的胶质胎座、转色期的心室隔壁、红果期的萼片与果实维管束中表达量较高。3.成功克隆到SlWEET11b基因的全长,采用双酶切的方法进行过表达载体的构建,同时利用Gateway技术构建沉默表达载体。利用农杆菌介导的番茄果实注射方法将构建好的过表达和沉默载体在番茄花后21d的果实中进行瞬时表达,qRT-PCR结果分析表明过表达载体注射番茄果实3d后SlSWEET11b基因表达量明显高于对照果实;同样将构建好的沉默载体注射到番茄的果实后SlSWEET11b基因的表达量明显降低。以上结果表明构建的过表达载体和沉默载体能够影响SlSWEET11b基因的表达,可以用于进一步的番茄遗传转化分析。4.利用Micro-Tom番茄建立了稳定的遗传转化体系,通过农杆菌介导将基因的沉默载体转化番茄,已获得SlSWEET11b沉默株系7株,通过PCR鉴定分析后获得4株显示阳性的番茄植株,可用于进一步的功能分析。
【学位授予单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S641.2

【参考文献】

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本文编号：1323526