猪圆环病毒2型抗体检测试纸的研制
本文关键词：猪圆环病毒2型抗体检测试纸的研制 出处：《郑州大学》2017年硕士论文 论文类型：学位论文
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【摘要】：猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)能够引发断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS),对养猪业危害极大。PCV2不断变异且易与其他病毒混合感染,为其检测带来重重困难。目前PCV2抗体检测方法主要有酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和胶体金免疫层析试纸(immunochromatographic strip,ICS),其中ICS具有快速、灵敏、特异、结果易判读、不需要专业实验操作人员和精密的仪器设备等优点,因此比较适用于大量临床血清的现场快速检测。本研究旨在获得具有良好免疫反应性的PCV2重组衣壳蛋白(capsid protein,Cap protein),并制备PCV2抗体检测胶体金免疫层析试纸,以期给PCV2疫苗的评价及免疫方案的制定提供技术支撑。本研究的内容和结果如下:1.猪圆环病毒病2型Cap蛋白的纯化本研究将菌种pET-28a-ORF2-BL21,进行IPTG诱导表达,利用镍亲和层析法纯化可溶性重组Cap蛋白,并对其进行鉴定。结果表明,表达的重组蛋白分子量约为26 kDa,主要以可溶性蛋白的形式存在,纯化后的蛋白纯度可达90%,浓度为1.31 mg/mL,每升菌液纯化可得30.6 mg蛋白。Western bloting和间接ELISA实验证实重组蛋白能够与PCV2阳性血清反应。本研究所制备的重组Cap蛋白具有较高的纯度和良好的免疫反应性,有望用于PCV2抗体检测免疫层析试纸的研制。2.猪圆环病毒2型抗体检测胶体金免疫试纸的研制用胶体金标记重组PCV2 Cap蛋白,并将标记后的Cap蛋白喷涂于玻璃纤维膜上,制备金标垫,将金黄色葡萄球菌A蛋白喷涂在检测线上,并将PCV2多克隆抗体IgG喷涂在质控线上,组装成试纸条,鉴定试纸条的性能。结果显示,该试纸结果判读时间为5 min,对PCV2阳性血清有高度的特异性,而与猪其它相关病毒的阳性血清无交叉反应,试纸条的灵敏性为1㑳25600与商品化ELISA试剂盒相近。试纸在室温存储6个月,其性能无明显变化。用该试纸检测274份血清样品,结果表明,其与国产猪圆环病毒2型ELISA试剂盒总符合率为98.17%(269/274)。本研究制备的PCV2抗体检测胶体金免疫层析试纸具有高度特异、快捷灵敏、稳定准确且操作简单等特点,适用于大量临床样品的检测,为PCV2的抗体检测提供了有效的工具。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S852.651
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，本文编号：1327371
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