三聚氰胺及其与三聚氰酸联合肝毒性的蛋白质组学研究

发布时间：2017-12-25 23:02

  本文关键词：三聚氰胺及其与三聚氰酸联合肝毒性的蛋白质组学研究　出处：《沈阳农业大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

  更多相关文章： 三聚氰胺 三聚氰酸 差异蛋白组学 iTRAQ

【摘要】：目前关于三聚氰胺及三聚氰酸的毒性研究主要是围绕肾脏、泌尿、神经、生殖、免疫等方面展开的,还没有任何学者对三聚氰胺毒性在整体差异蛋白角度进行研究。本试验采用iTRAQ定量蛋白质组学技术探究三聚氰胺及其与三聚氰酸联合攻毒小鼠的毒性,对小鼠肝脏的全部蛋白进行差异分析,确定三聚氰胺类物质对肝脏发挥毒性作用的主要差异蛋白,寻找靶蛋白并进行验证,再对蛋白所属的细胞信号传导通路进行分析,从而探讨该类物质作用于小鼠肝脏的毒性作用机理,以完善三聚氰胺的相关毒理学资料。本研究将30只体重为22-24g的SPF级KM系雄性小鼠随机分为空白对照组、三聚氰胺组(30mg·kg-1)和三聚氰胺与三聚氰酸联合组(15+15mg.kg-1)。连续饲养28d,隔天灌胃,第29d无菌取出肝脏制成蛋白样品,进行SDS-PAGE检测。采用iTRAQ技术进行质谱鉴定和蛋白检索后得到差异蛋白;对差异蛋白进行GO分析和KEGG pathway分析等生物信息学分析,寻找与差异蛋白显著相关的生物学功能、所参与的代谢通路和信号转导途径等;筛选出差异蛋白PDIA6,HSP70和HSPA4L并用Western-blot法进行验证。结果表明:1.利用蛋白组学iTRAQ技术对小鼠肝脏进行检测,共计获得20284个唯一肽段,鉴定到3695个差异蛋白质。三聚氰胺组与空白对照组相比,共有166个显著差异蛋白,其中130个上调,36个下调,.三聚氰胺与三聚氰酸联合组共有差异蛋白242个,其中上调161个,下调81个(上调1.2,下调0.83,值0.05)。2.三聚氰胺组的差异蛋白参与的生物学过程有69种,分子功能有23种,细胞组分有23种;联合组有51种差异蛋白参与生物学过程,46种参与分子功能,10种参与细胞组分。3.三聚氰胺组与空白对照组相比有10条KEGG富集通路;联合组与空白对照组相比有13条KEGG富集通路。4.本实验采用Western-blot法检测HSP70、PDIA6和HSPA4L的蛋白表达水平。发现与空白对照组相比,三聚氰胺与三聚氰酸联合组的HSP70和HSPA4L的蛋白表达水平明显低于空白组,PDIA6的蛋白表达水平明显高于空白组(p0.05);三聚氰胺组与对照组相比,HSPA4L的蛋白水平降低(p0.05),其他表达水平无统计学意义。结果可以看到与iTRAQ测得的差异蛋白表达趋势是相符的,同时也说明三聚氰胺与三聚氰酸联合使HSP70和HSPA4L表达下调,PDIA6表达上调,对内质网应激通路促进细胞凋亡起到积极作用。本研究也说明采用先进的差异蛋白质组学技术iTRAQ标记的方法对三聚氰胺及其与三聚氰酸联合肝脏毒性作用的研究是可信的,为三聚氰胺的研究提供一些微观基础资料。
【学位授予单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S859.8

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 陈正勤;何丽霞;刘升学;;MiR-429及其目标基因HSPA4L在弱精症低活力精子中的表达[J];四川大学学报(医学版);2016年06期

2 陈潇飞;何晓红;叶绍辉;宋伸;杨敏;王月月;马月辉;;iTRAQ技术及其在动物蛋白质组学中的研究进展[J];黑龙江畜牧兽医;2016年07期

3 李雅琴;马晓国;樊少峰;;饲料中添加三聚氰胺对吉富罗非鱼肝脏酶活性的影响[J];水产科学;2015年02期

4 郭慧玲;邵玉宇;孟和毕力格;张和平;;肠道菌群与疾病关系的研究进展[J];微生物学通报;2015年02期

5 范兴君;;肝脏毒理学的蛋白质组学研究进展[J];牡丹江医学院学报;2012年04期

6 袁旭;焦光源;刘建中;马玲;李红;赵超英;高星;;三聚氰胺亚急性染毒致大鼠泌尿系统损害的研究[J];毒理学杂志;2011年06期

7 谢志辉;袁慧;陈茜;郭成志;朱丽;邓思君;杨e，

本文编号：1334783